胶质瘤干细胞中耐药基因的表达与化疗之间的关系

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1、江苏大学硕士学位论文胶质瘤干细胞中耐药基因的表达与化疗之间的关系姓名：杨伟现申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：王存祖20120606江苏大学硕士学位论文中文摘要目的脑肿瘤干细胞(braintumorstemcells，BTSC)的发现为胶质瘤化疗耐药机理提供了新的假说，即是因为肿瘤干细胞发生了耐药，而BTSC发生耐药的主要原因是相关耐药基因的表达，其中比较重要的是ABCG2。通过化疗杀死敏感细胞，存留细胞即为耐药细胞，这些细胞与BTSC之间的关系是解开耐药机理的重要途径，目前还不清楚。本研究以胶质瘤肿瘤干细胞为靶细胞，通过化疗过程对BTSC数量及生物学

2、特性影响的研究，探讨肿瘤干细胞与化疗耐药之间的关系。分为三部分：1．胶质瘤U251细胞中CDl33+细胞比例及干细胞特性分析；2．替莫唑胺(TMZ)化疗对U25l细胞中CDl33+细胞的影响；3．替莫唑胺化疗对U251细胞中CDl33+细胞中耐药基因表达的影响。方法第一部分：利用免疫荧光染色检测胶质瘤U251细胞中CDl33、巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经胶质细胞纤维酸性蛋白(GF．AP)等蛋白表达，分析CDl33+细胞与CDl33-细胞中Nestin、NSE、GFAP阳性细胞存在的差异。第二部分：通过MTT实验评估U251细胞

3、对TMZ的敏感性。利用免疫荧光染色和Westemblot检测TMZ作用前后U25l细胞中CD133、Nestin、NSE、GFAP等基因表达，分析TMZ对CDl33+细胞的影响。第三部分：利用免疫荧光染色和Westemblot检测TMZ作用前后胶质瘤U25l江苏大学硕士学位论文细胞中ABCG2、MRP及P．gP等耐药基因的表达，分析化疗对CDl33+细胞中耐药基因表达的影响。结果第一部分：胶质瘤U251细胞中CDl33+细胞比例为0．060-a：0．003：在CDl33+细胞中，Nestin阳性细胞，NSE和GFAP阴性细胞比CDl33一中明显增多；在CDl

4、33-细胞中，也存在Nestin阳性细胞，数目较CDl33+中明显减少，相反Nestin阴性细胞，NSE和GFAP阳性细胞明显增多。第二部分：在胶质瘤U251细胞中，未加入TMZ组CDl33+细胞比例为60％左右，加入TMZ组CDl33+细胞比例为33．7％左右，两者比较差异有统计学意义(P

5、；相反，GFAP和NSE表达在TMZ作用后明显减少(P<0．05)。第三部分：①通过MTT评估发现，胶质瘤U251细胞在不同浓度的TMZ作用下，随着浓度的升高，各浓度组的细胞存活率逐渐递减，但是第3天后有所缓和，第5天与第3天比较，无统计学差异(P>0．05)；U251细胞在TMZ浓度为0．059／L以上，即使浓度增加，细胞抑制率亦无明显改变，上述结果提示U251细胞对TMZ存在耐药现象。②在TMZ作用前CDl33+细胞中ABCG2、P—gP及MRP等耐药基因的表达明显低于TMZ作用后(P

6、MRP等在TMZ作用前江苏大学项士学位论文后均有表达，但是在TMZ作用后明显增加(P

7、esanewhypothesisthatcancerstemcellsresistantandBTSCresistancethemainreasonisrelatedtoresistanceistheexpressionofgene,oneofthemoreimportantisABCG2．Bychemotherapytokillthesensitivecellsretainedthecellisresistantcells，therelationshipbetweenthesecellsandBTSCisanimportantwaytounlockthem

8、echanismofresistanceisuncl