雷替曲塞对人胃癌裸鼠移植瘤生长的影响及其机制的研究

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1、河北医科大学硕士学位论文雷替曲塞对人胃癌裸鼠移植瘤生长的影响及其机制的研究姓名：李华申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：刘巍201203中文摘要雷替曲塞对人胃癌裸鼠移植瘤生长的影响及其机制的研究摘要目的：胃癌是在世界范围内排名第四位的常见恶性肿瘤，每年有100万的新发病例，其中将近70％发生在发展中国家。2007年，全球范围内大约有80万人死于胃癌。我国胃癌平均年死亡率约为25．2／10万人口。5．氟尿嘧啶(5-Fu)在胃癌的化疗中应用广泛，常需连续或持续静脉滴注，应用不够方便。埋置中心静脉导管解决了此问题，但埋置中心静脉导管同时也增加了护理

2、和费用的问题。雷替曲塞(Raltitrexed)是一种喹唑啉叶酸盐类似物，为一种新型的水溶性胸苷酸合成酶(TS)抑制剂。它无需亚叶酸钙增效，使用方便。目前雷替曲塞主要应用于晚期结直肠癌患者的治疗。在胃癌的研究中，雷替曲塞联合其它细胞毒性药物的临床试验显示是有效的，但尚缺乏大规模临床试验证实。雷替曲塞在胃癌的应用上还值得进一步研究。本研究拟通过建立人胃癌细胞MGC．803裸鼠皮下移植瘤实验模型，分别给予雷替曲塞、5．Fu、生理盐水药物干预，初步探索雷替曲塞对人胃癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响及其机制。方法：l、建立人胃癌细胞MGC．803裸鼠皮下移植瘤

3、模型。2、实验分组及药物干预：将24只成瘤裸鼠模型随机分组为雷替曲塞组、5-Fu组、对照组，每组8只，分别给予裸鼠腹腔注射雷替曲塞(7．5mg／Kg／d)、5-Fu(15mg／Kg／d)、生理盐水，每只0．2ml，连续5天，休息2天后，继续给药5天。监测各组裸鼠体重变化，同时观察裸鼠精神状态、饮食、大便情况。3、评价抑瘤作用：每隔3天用游标卡尺测量裸鼠肿瘤长径(A)和垂直横径(B)，按公式V=AxB2／2计算裸鼠肿瘤体积，并绘制肿瘤体积增长曲线。给药休息2天后，全部裸鼠脱颈椎处死，立即剥离肿瘤，并对肿瘤进行称重，计算抑瘤率，抑瘤率=(对照组瘤重．

4、实验组瘤重)尉照组瘤重*100％。4、流式细胞仪测定瘤细胞的周期分布和凋亡。5、采用RT-PCR、Westernblot印迹法检测各组肿瘤p53mRNA及p53蛋白的表达水平，并比较三组之间的差异。6、统计分析：采用SPSS13．0软件对各组数据进行统计分析。计量数据以i士s表示，多组样本间均数比较采用单因素方差(One．wayANOVA)分析，P

5、u组裸鼠体重均明显低于对照组体重，统计学有显著性差异(脚．01)。且5．Fu组裸鼠体重低于雷替曲塞组裸鼠体重(Po．05)。3荷瘤裸鼠瘤重及抑瘤率：雷替曲塞组、5．Fu组和对照组裸鼠瘤重分别为：0．78+0．069、O．

6、83±O．089、1．534-0．139，雷替曲塞组和5-Fu组裸鼠瘤重均低于对照组瘤重，统计学有显著性差异俨0．05)。雷替曲塞组和5-Fu组的抑瘤率分别为49．02％、45．75％。4荷瘤裸鼠瘤细胞的细胞周期分布和凋亡：雷替曲塞组和5-Fu组瘤细胞的G0／G1期比例较对照组比例明显减低∽0．01)，而S期比例较对照组明显升高俨0．05)。三组G2／S期比例之间无统计学差异(P>o．05)。三组之间的凋亡率有统计学意义

7、。与对照组的凋亡率相比，雷替曲塞组和5．Fu组的瘤细胞凋亡率显著高于对照组(P<0．01)，而雷替曲塞组的瘤细胞凋亡率也高于5-Fu组的凋亡率俨《o．05)。5雷替曲塞组中裸鼠肿瘤p53mRNA相对表达量为：0．521±O．046；5．Fu组中裸鼠肿瘤p53mRNA相对表达量为：0．4874-0．041；对照组中裸鼠肿瘤p53mRNA相对表达量为：0．159±0．025。雷替曲塞组裸鼠肿瘤p53蛋白相对表达量为：0．509+0．049；5-Fu组裸鼠肿瘤p53蛋白相对表达量为：0．474_-l-0．034；对照组裸鼠肿瘤p53蛋白相对表达量为：O

8、．1934-0．021。与对照组相比，雷替曲塞组和5．Fu组裸鼠肿瘤p53mRNA和蛋白表达水平显著升高俨<0．01)，而雷替曲塞组和5