双氢睾酮对samp8小鼠海马树突棘的快速作用

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1、河北医科大学硕士学位论文双氢睾酮对SAMP8小鼠海马树突棘的快速作用姓名：张超申请学位级别：硕士专业：人体解剖与组织胚胎学指导教师：崔慧先201203中文摘要双氢睾酮对SAMP8小鼠海马神经元树突棘的快速作用摘要目的：应用SAMP8小鼠为研究对象，观察去势及雄激素补充治疗对海马树突棘的快速作用，初步探讨其非基因作用机制，为雄激素替代治疗提供实验依据。方法：选用雄性7月龄SAMP8小鼠90只。(1)选用20只SAMP8小鼠用于血清雄激素水平放免测定。随机分为假手术组(简称Sham组)和去势组(简称Castrated组)，去势组全部切除睾丸，随后根

2、据去势时间不同，分为去势l天组(简称C．1d组)，去势2天组(简称C．2d组)，去势3天组(简称C．3d组)，每组各5只。各组小鼠采取断头取血，静置后，3000转室温离心20分钟，取上清，一20℃保存待测。采用放射免疫法进行雄激素水平测定，以确定去势后雄激素殆尽时间。(2)选用70只SAMP8小鼠，随机分为假手术对照组(简称Sham组)、去势组(简称Castrated组)、去势+雄激素补充治疗组(简称DHT组)，再根据给药时间不同，将治疗组分为DHT-15min组、DHT-30min组、DHT-lh组、DHT02h组和DHT-2ld组，每组10

3、只。另选取10只雄性SAMRl小鼠作为同源正常对照组(简称Control组)。Castrated组和DHT组小鼠切除睾丸。DHT组于去势术3天后，颈背部皮下注射DHTlmg／(kg·day)，Sham组注射等量玉米油，DHT-21d组连续给药2l天。组织制备及染色观察：每组取5只小鼠，将输液针刺入左心室，同时剪开右心耳，用生理盐水快速冲洗，4％多聚甲醛灌注。将脑组织从正中矢状位分为左右两半，自上丘至视交叉节段取脑组织，一半用于Golgi染色，计数各组小鼠海马CAl区第2～3级树突树突棘密度；一半制备成石蜡切片，用于抗drebrin免疫组化染色，

4、分析各组小鼠海马CAl区光密度。蛋白提取及Westernblot：每组取5只小鼠，用6％的水合氯醛麻醉后迅速断头，将颅骨去除，剥除脑膜，暴露脑组织后，分离出海马。PBS清洗后，迅速置于裂解液中，充分匀浆后冰上静止30min；12000转4V中文摘要离-tl,20分钟，弃沉淀，取上清液，小部分上清液用于蛋白质浓度的测定(考马斯亮蓝法测定)，其余部分上清液置于．80℃冰箱储存，用于Westernblot检测。结果：1．血清雄激素水平放免测定结果：Sham组血清雄激素浓度为597．53士19．99ng／dl，C．1d组为97．14+9．88ng／dl

5、，C．2d组为28．83+6．08ng／dl，C一3d组为0．03士0．Olng／dl。2．Golgi染色结果：Control组海马CAl区树突棘排列密集，树突棘数目为l-．314+0．028／gm，明显高于其它各组(P

6、T-2h组树突棘密度为1．042士0．018／gm和1．015+0．021／I-tm，较Castrated组增加(P<0．05)，但低于DHT-15min组和DHT-30min组(P<0．05)。DHT-21d组树突棘密度(1．153+0．024)与Sham组(1．167土0．024)相比差异无统计学意义(P>0．05)。3．抗drebrin免疫组化结果：Control组海马CAl区染色深，其光密度值为0．374士0．018，明显高于其他各组(P

7、他组(P<0．05)。DHT-15min组和DHT-30min组光密度值分别为0．25610．011和0．249+0．008，较Castrated组和DHT-lh组与DHT-2h组增加(P<0．05)。DHT-lh组和DHT-2h组光密度值为0．224+0．013和O．206士0．007，较Castrated组增加(P<0．05)，但低于DHT-15min组和DHT-30min组(PO．05)。4．WesternBlo

8、t结果：Control组海马树突棘中drebrin表达丰富，其积分光密度值为3．123士0．054，明显高于其他各组(P