异丙酚对高糖诱导内皮细胞损伤的保护作用及机制

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1、学校代码：10246'j：09211230020异丙酚对高糖诱导内皮细胞损伤的保护作用及机制院系：肿瘤医院专业：麻醉学姓名：朱敏敏指导教师：i草志明指导小组成员陈家伟完成H期：2012年22目录英文缩写词表中文摘要Abstract_、/■?>.0IJB材料与方法1.实验材料1.1细胞及细胞培养1.2主要试剂1.3主要仪器2.实验方法2.1细胞培养2.2NO的测量2.3超氧阴离子的测量2.40N00—检测2.5Westernblot免疫印迹实验2.6内皮细胞内BH4的检测2.7数据统计2.8有关溶液的配置辦概1.异丙酚改善高糖诱导的内皮细胞功能失调2.异丙酚改善高

2、糖诱导eNOS脱偶联3.高糖诱导超氧阴离子堆积能被eNOS抑制剂所阻断4.异丙酚提高高糖环境下eNOS的磷酸化水平5.异丙酚提高高糖环境下内皮细胞W14的水平6.异丙酚减少高糖环境下内皮细胞内过氧化氮的水平7.异丙酚增加高糖环境下内皮细胞GTPCHI的表达職参考文献隨蘭相关综述英文缩写词表eNOSendothelialnitricoxidesynthase内皮源性一氧化氮合成酶NONitricoxide氧化氮〇2—Superoxideanion超氧阴离子iNOSinducibleNOsynthase诱导型一氧化氮合成酶BH,,tetrahydrobiopteri

3、n四氢生物喋呤0N00"peroxynitrite过氧化氮GTPCHIguanosinetriphosphatecyclohydrolaseII型三磷酸鸟苷环化水解酶Glucose葡萄糖Propofol异丙酚4中文摘要异丙酚对高糖诱导内皮细胞损伤的保护作用及机制目的：围术期高血糖是临床常见的代谢紊乱。高血糖通过过氧化氮（oNcxr)介导的内皮源性一氧化氮合成酶（eNOS)脱偶联诱导内皮的功能失调。已有文献报道异丙酚（propofol)可以改善高糖诱导的内皮细胞功能失调，然而其机制还不是很清楚。我们假设异丙酚可以通过清除0_0_从而恢复eNOS的脱偶联，进而改善高糖诱导内皮细胞的功能

4、失调。方法：人脐静脉内皮细胞用高糖（30mM)培养基培养3天，然后用不同浓度的异丙酚（0.2，1，5，25uM)处理不同的时间（0.5，1,2,4h)。内皮细胞用低糖（5mM)培养基处理3天作为对照。一氧化氮（NO)用硝基还原酶法检测；超氧阴离子（Or)用细胞色素C减少法或DHE荧光法检测。eNOS总蛋白，单体及双体的表达，eNOS(Ser1177)磷酸化水平，诱导型一氧化氮合成酶（iNOS)总蛋白，单体及双体的表达，0N00_,I型三磷酸鸟苷环化水解酶(GTP⑶I)表达，用蛋白免疫印迹来检测。四氢生物喋呤03?)用液相色谱一质谱法检测。结果：同5mM葡萄糖处理相比，30mM葡萄糖

5、能显著减少内皮细胞NO的生成(p<0.001),增加超氧阴离子的堆积(p=0.0026)，异丙酚能逆转两者的改变，并与处理浓度和时间存在依赖关系。同5mM葡萄糖处理相比，30mM葡萄糖增加eNOS总蛋白的表达(p〈0.001)，但降低了eNOS双体/单体的比例(p=0.0001),减少了eNOS的磷酸化水平(p〈0.001)。异丙酚并不影响30mM葡萄糖引起的eNOS总蛋白的表达，但可以恢复eNOS双体/单体的比例(p=0.0005)，增加eNOS的磷酸化水平（p〈0.001)。30mM葡萄糖诱导的超氧阴离子堆积可以被eNOS抑制剂hydrochloride阻滞。同5mM葡萄糖处理

6、相比，30mM葡萄糖减少BH4的水平(p:0.0001)、GTPCHI的表达(p〈0.001)、增加0N00的水平(p=0.0003)，这些改变能被异丙酚所逆转(P=0.0045，p<0.001,p=0.0001)0结论：异丙酚能改善高糖诱导的内皮细胞功能失调，其机制可能是异丙酚抑制了0N00_介导的BH,降解，恢复eNOS的脱偶联。关键词：高血糖，内皮源性一氧化氮合成酶，血管内皮，功能失调中图分类号：R543.65英文摘要PropofolProtectsAgainstHighGlucose-InducedEndothelialDysfunctioninHumanUmbilical

7、VeinEndothelialCellsBACKGROUND:Hyperglycemia,viaperoxynitrite-mediatedendothelialnitricoxidesynthase(eNOS)enzymaticuncoupling,inducedendothelialdysfunction.Propofolhasbeenreportedtoimprovehighglucose-inducedendothelialdysfunction.Howeve