肿瘤相关基因的突变检测及功能和调控研究

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1、浙江大学博士学位论文肿瘤相关基因的突变检测及功能和调控研究姓名：潘敏申请学位级别：博士专业：病理学与病理生理学指导教师：祁鸣20120518浙江人学博。}：学位论文中文摘要肿瘤相关基因的突变检测及功能和调控研究浙江大学医学院博士研究生导师病理学与病理生理学潘敏祁鸣中文摘要第一部分：中国入乳腺癌相关基因召尼翻耽基因的突变检测及LoVD数据库构建目的：作为国际基因变异组计划的一部分(HVP．China)，利用LoVD格式，构建一个针对中国人群的觥C一，应基因变异新数据库。方法：搜索PubMed以及一些中文数据库如万方、维普等，收集所

2、有在中国人群中报道过的龆c彳，／2基因的变异，将其以正确的格式提交到LOVD数据库。此外，在临床基因检测过程中，收集家族性乳腺癌和早发性乳腺癌患者的外周血样本，提取DNA，利用PcR和测序检测觥C■J基因的变异，并将新发现的变异提交到数据库。结果：到目前为止，根据我们数据库中的内容，在中国人的觥C，重J和础C么2基因上已经分别发现了136和62个不同的变异．与其他种族的人群相比，中国人有其独特的舢c×，彪基因突变热点和高频突变．在这两个基因上的14个最常见的致病突变中，有50％是BIC数据库中未报到过的．结论：在中国人群中建立了

3、第一个船C，蕾忱基因变异数据库．引它C么J7应基因在中¨浙江人学博lj学位论文中文摘要国人中的突变与其他种族的人群有所不同。该数据库的建立有助于科研工作者和临床医生对遗传性乳腺癌和卵巢癌以及其它由歙C么J／2基因突变引起的肿瘤的研究、检测和诊断，尤其有利于今后中国人群的觥C么J／2基因检测。第二部分：D丁肋J基因在胃癌中的功能和调控研究目的：明确D7’肋J『基因在胃癌细胞中的功能，寻找其可能的调控因子以及其调控机制。方法：在正常胃细胞和胃癌细胞系中、TSA处理前后的胃癌细胞中以及临床手术收集的正常和胃癌组织中，用实时定量lmPC

4、R检测D册J『的表达水平。用不同的HDACsiRNA转染胃癌细胞，以明确D舯J『的表达主要是受到哪一个HDAC的抑制。荧光素酶报告基因分析用于确定D肿，基因的启动子区域，然后用ChlP检测p53蛋白和D7’粕J『启动子的结合情况．为了验证Dn旧，的基因的抑癌功能，细胞在转染D7’粕，表达载体或siRNA后进行MTS和克隆形成试验．westemblot用于检测蛋白表达水平．结果：D肿J『在胃癌中表达下调，TSA处理或转染HDACsiRNA能上调其表达。D丁∥DJ在胃癌中的下调主要是受到HDAC3的抑制。P53蛋白能够与D丁∥DJ『

5、启动子结合并促进其表达，而HDAC3会影响两者的结合作用。在胃癌细胞中过表达外源D肿J『能够抑制细胞的生长和克隆形成能力，而在正常细胞中用siI酬A敲除该基因后，细胞生长速度则加快．结论：D聊，在胃癌中起着抑癌基因的功能，它的表达受到HDAC3的抑制，而p53能促进其表达。关键词：B尺C么J『，觥C么Z基因变异数据库，抑癌基因，乳腺癌；D7’粕，，胃癌，HDAC，p53，抑癌基因浙江人学博I：学位论文英文摘要MutationDetec“onandMolecularMechanismResearchofThmorReIatedGe

6、nesZheji锄gUniversitySchoolofMedicineAuthor’ssignatulr；eSuperVisor’ssignaturePathologyandPhysiopath0109yMinP锄MingQiAbstractPartone：MutationdetectionandLoVDDatabasefor曰月(■J忍Genein恤eChinesePopulationobjective：Tocreatedanovelvariantsd砒aba∞for歙CZJ锄d歙C■2int11eChineSepopula

7、tionusingtheLeidenOpenVari“onDatabaSe(LOVD)fonnat，asp矾oftheIntemationalV撕omeProject(HVP—China)Methods：WesearchedPubMed锄dsomeChine鸵searchingenginestocollectallnleVari锄tsof觥酬，卸d曰RC么2intheChinesepopulationthathaVebe朗reponed．1naddition，pe^pher砒bloodsampIesofthepatientSwi

8、tIlf．锄iliar0re觚ly-onsetbreaStc锄cer、Ⅳerecolleted．DNAw舔abs仃acted，PCRand辩quencingwe陀uSedfordetectionof剧℃CZ，gene．111enoVelVariationobse