内皮祖细胞介导的trail基因治疗肝癌的实验研究

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1、东南大学硕士学位论文内皮祖细胞介电霸TRAIL基因治疗肝癌的实验研究姓名：葛夏青申请学位级别：硕士专业：临床医学指导教师：孙喜太2012-06-01中义摘要内皮祖细胞介导TRAIL基因治疗肝癌的实验研究中文摘要目的：本实验通过研究内皮祖细胞介导的TRAIL基因对小鼠肝癌H22细胞皮下移植瘤的影响，探索TRAIL基因转染内皮祖细胞对肝癌的治疗作用，为临床应用TRAIL基因治疗肝癌提供理论基础。方法：消化收集小鼠骨髓来源的单核细胞，通过内皮祖细胞特有的EGM．2培养基进行培养，经荧光及流式细胞仪鉴定，通过PCR扩增TRAIL基因，将TRAIL基因与

2、pcDNA3．1载体连接，采用腺病毒转染入内皮祖细胞中，并用westernblot进行TRAIL基因的表达鉴定。通过腹腔接种方法培养小鼠肝癌H22细胞，建立小鼠皮下移植瘤动物模型，随机分为3组，第一组用生理盐水为对照，经尾静脉注射，第二组用空载腺病毒转染内皮祖细胞，经尾静脉注射，第三组用携带TRAIL基因的重组腺病毒转染内皮祖细胞，经尾静脉注射，分别观察治疗效果。统计学处理：数据采用SPSSll．0软件处理，结果以均数±标准差表示，应用t检验进行统计学分析，以P<0．05为有统计学意义。结果：小鼠骨髓来源的单核细胞经EGM．2培养基诱导培养后，

3、为内皮祖细胞。构建TRAIL基因与pcDNA3．1的重组质粒，经酶切及测序鉴定，重组质粒构建成功。与空载腺病毒相比，westernblot检测发现TRAIL基因有表达。空载体组的抑瘤率为20．98％，但经统计学分析与对照组无显著性差异，转染TRAIL基因组的抑瘤率为47．77％，与对照组有显著性差异。结论：成功培养了内皮祖细胞，成功构建了TRAIL基因与pcDNA3．1的重组质粒，将该重组质粒转染腺病毒，经westernblot鉴定TRAIL基因可以在腺病毒载体中进行表达。TRAIL基因转染内皮祖细胞可以抑铝i]H22移植瘤的生长。I关键词l内

4、皮祖细胞；TRAIL基因；肝癌英义摘要TheEffectofEndothelialProgenitorCells—mediatedTRAILonHepatocellularCarcinomaCellsEnglishAbstractObjective：Toinvestigatetheinfluenceofendothelialprogenitorcells-mediatedTRAILonsubcutaneouslytransplantedtumorH22．Itwillprovideatheoreticalbasisforthetreatmento

5、flivercancelMethods：Bonemarrow-derivedmononuclearcellsofmouseweredigested，collected，culturedthroughthemediumofendothelialprogenitorcell-specificEGM一2，andidentifiedbyflowcytometry．TheTRAILgenewasamplifiedbyPCR，connectedwiththepcDNA3．1vector,andtransfectedintotheEPCsbyadenovir

6、us．TheexpressionoftheTRAILgenewasidentifiedbywesternblot．H22cellsweresubcultured．Themicesubcutaneouslytransplantedtumoranimalmodelswereestablished．Themodelswererandomlydividedinto3groups．ThefirstgroupwithsalineWasacontrolgroup，andWasinjectedthroughthetailvein．Thesecondgroupw

7、asinjectedwithEPCstransfectedbyno—loadadenovirusthroughthetailvein．ThethirdgroupwasinjectedwithEPCstransfectedbyrecombinantadenoviruscarryingTRAILgenethroughthetailvein．Andtheeffectofthethreetreatmentwereobserved．Statisticalanalysis：theexperimentaldatawasanalyzedbySPSS11．0．R

8、esults：Bonemarrow—derivedmononuclearcellsofmouseculturedbyEGM-2wereEPCs．The