羊微孢子虫病流行病学调查及分子特征初步研究

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1、河南农业大学硕士学位论文羊微孢子虫病流行病学调查及分子特征初步研究姓名：李梦婕申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：宁长申201205河南农业大学2012届硕士研究生毕业论文摘要微孢子虫是一种专性细胞内寄生的真核单细胞寄生物，能够感染多种无脊椎动物和脊椎动物。首例微孢子虫感染丁^1857年在家蚕体内发现，首例哺乳动物感染微孢子虫丁．1922年在兔体内发现，1959年发现首例人微孢子虫感染，1985年首次在AIDS病人体内发现微孢子虫感染。随后，微孢子虫感染哺乳动物(包括人)的报道越来越多，迄今已知有至

2、少8个属14种微孢子虫可以感染人，其中比氏肠微孢子虫(Entercytozoonbieneusi)、兔脑炎微孢子虫(Encephalitozooncuniculi)、肠脑炎微孢子虫(E．intestinalis)干lI海伦脑炎微孢子虫(E．heHem)是最常见的人兽共患微孢子虫。微孢子虫作为一种重要的人兽共患寄生虫，已引起了研究者们的广泛关注。近年米，有关微孢子虫感染动物及人的报道越米越多。微孢子虫感染免疫缺陷的人或动物主要引起慢性、持续性腹泻，逐渐消瘦，严重者甚至导致i；，E亡；感染免疫功能n

3、J二常的人

4、或动物主要引起急性、白限性腹泻或早隐性感染：此外微孢子虫可以感染人的眼部引起角膜结膜炎等症状。国内外关丁．人以及猪、牛等其他动物感染微孢子虫的报道较多，而关丁．羊微孢子虫病的报道很少弛。近年来，河南省养羊业的规模逐渐扩人，为了解我省部分地

5、又：羊微孢子虫病的流行情况，为微孢子虫病的防治及今后的研究提供参考依据，对我省部分地区的羊群进行了微孢子虫感染情况调查及分子特征的初步研究。1、为了解我国部分地区绵羊肠道寄生虫病的感染及危害情况，科学地制定防治计划，合理指导动物肠道寄生虫病的防治I：作，丁．2011年3月

6、一2012年2月对河南省6个地区(郑州、登封、安刚、洛刚、二『J峡、商R)及占林烈辽、辽’j。朝⋯、山尔力；营等地的1109只绵羊进行直肠采集粪便样品，应川卢戈氏碘液染色法、饱和蔗糖溶液漂浮法利麦克马斯计数法等方法对所有样晶进行检布，结果1078份样品布到不同种寄生虫感染，总感染率为97．20％：共奄到球虫、隐孢子虫、贾第虫、鞭虫、细颈线虫、圆线虫、莫尼茨绦虫、矛形双腔吸虫、阿米巴等9种f类)肠道寄生虫，其中球虫感染率最高，为93．51％；寄生虫；昆合感染情况较普遍，80．70％(895／1109)的绵羊}

7、昆合感染2-5种寄生虫，其中以j昆合感染2种羽I3种寄生虫的所lI『‘比例最高，分别为41．90％干1144．47％。2、据报道，可感染羊的微孢子虫有3种，分别为比氏肠微孢子虫(E．bieneusi)、兔脑炎微孢子虫(Ec“”七“，f)和肠脑炎微孢子虫(E．intestinalis)。为了解河南省部分地区羊微孢子虫的感染情况及虫体的形态特征，tL}』韦伯氏铬变素2R染色法对2011年7月．2011年12月采白河南省八个地

8、又：的802只羊的新鲜粪便样晶进行检夼，结果检山15份刚性样品，检山率为1．78％。染

9、色后观察到微孢子虫孢子早卵圆形，被染成粉红色，中间部分有带状结构，粪渣、细菌等杂质被染成绿色，易丁．区别。为确认羊微孢子虫感染率及感染的微孢子虫种类，合成二对种特异性引物，，l={j巢氏PCR对802份粪便样品进行检测。结果检山23份

10、j

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12、．

13、生样品，感染率为2．87％，基因片段K607bp，均为比氏肠微孢子虫。不同品种、年龄的羊及不同季‘1，、不同饲养方式饲喂的羊，微孢子虫感染率存在差异，绵羊感染率(3．90％)高丁．山t-(i．47％)；幼龄羊感染率(3．16％)高丁成年羊(2．44％)；7-9月羊感

14、染率(4．59％)高丁．10．12月羊(0．82％)：放牧羊感染率(4．55％)高丁．舍饲羊(1．94％)。3、为研究河南省部分地

15、又：羊感染的微孢子虫分子特征，对PCR检山的23个刚性样品进行测序，将测序所得序列在Genbank中BLAST比对后，卜载得到的14序列，应用ClustalX1．81、Phyloip3．64、DNAstar4．0等生物信息学软件对15个序列进行比对、同源性分析及构建分子发育进第1贝共54页河南农业大学2012届硕二L研究生毕业论文化树。发现本次调查得到的分离株(JQ769381

16、)与分离白AIDS病人的比氏肠微孢子虫序zjlJ(AF024657)同源性高达100％，证实羊感染的微孢子虫均为比氏肠微孢子虫。JQ769381与分离白猕猴的比氏肠微孢子虫序列(AF023245)和分离白原牛的比氏肠微孢子虫(AY257180)均只有1个碱基的差异，同源性高达99．8％；JQ769381与分离自艾滋病人的比氏肠微孢子虫序xjiJ(AY298728禾IAY315717)有4个和5个碱基的差异，同源性