鸡痘病毒整合禽网状内皮组织增殖病病毒基因的检测分析

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1、山东农业大学硕士学位论文鸡痘病毒整合禽网状内皮组织增殖病病毒基因的检测分析姓名：车国喜申请学位级别：硕士专业：基础兽医学指导教师：刘思当20120615山东农业大学硕士学位论文中文摘要鸡痘病毒(FPV)野毒和疫苗毒整合禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)全基因或基因片段的现象普遍存在，由此引起的生物风险分析已成为许多研究学者关注的焦点。为进一步研究FPV野毒和疫苗毒基因组中REV前病毒序列的整合情况，对山东泰安及周边地区的14个FPV野毒分离株和国内外不同厂家的5个FPV疫苗株进行了REV前病毒整合区基因PCR扩增、核苷酸序列测定及基因分析。结果表明：14个FPV野毒株均整合了几乎全长的RE

2、V前病毒序列，这些序列之间高度同源，与美国分离的FPV毒株AF246698整合的REV序列同源性最高，与REV标准株同源性较低；但是，疫苗株仅整合部分或完整的REV．LTR序列，国产与进口疫苗株的整合序列长度不同，进口疫苗整合了486bp的几乎完整的REV．LTR序列，而国产疫苗整合的LTR片段普遍相对较小，仅为193bp。另外，与已报道的REV毒株相比，FPV野毒株整合的REV序列的env、gag和pol基因变异不大，但是LTR序列发生了明显变异，5'LTR长度为517bp，3’LTR长度为222bp，与国内外已知的REV毒株相比，这些整合株的3'LTR变异较大，其长度明显缩短。表明RE

3、V前病毒序列整合进FPV野毒株过程中经过了修饰，主要表现在两端的LTR序列发生明显变异、缺失，尤其是3'LTR的明显缺失。然而，疫苗株整合的REV．LTR序列虽然高度同源，且整合模式极其相似，均表现为U5区和R区全部丢失及U3区的部分丢失，未丢失部分在残余的5'LTR和3’LTR之间发生重排、缺失、突变、替换等变异现象，而且比野毒株整合的REV．LTR序列长度明显缩短。综上，所分离的山东部分地区的FPV野毒株均整合全长REV序列，整合毒株己成为FPV流行的优势毒株；疫苗株仅整合REV．LTR序列，且疫苗株的整合序列长度不同，进口疫苗整合了几乎完整的REV．LTR序列，而国产疫苗整合片断则相

4、对较小。发生整合的FPV毒株的致病性变化，整合疫苗的安全性及对整合FPV野毒的免疫保护作用有待于进一步研究。而关于疫苗整合REV．LTR序列长度不同，在疫苗效力、安全性等方面的差异有待进一步研究。·本课题的研究过程中，将收集的国内外5个厂家的FPV疫苗通过PCR和IFA方法，进行了传染性REV病毒粒子的检测，结果表明：5个厂家的鸡痘疫苗中有一株存在REV病毒序列，并且可以在感染细胞上检测到传染性病毒粒子。该REV的env基因序列与近期分离的REV毒株同源性很高，在99．9％"-'100％之间；与本试验分离的FPV野毒株整合的PFV．REV．eliV序列的的同源性均为100％。研究结果进一步

5、证明了鸡痘疫苗中存+i鸡痘病毒整合禽网状内皮组织增殖病病毒基因的检测分析在传染性REV病毒粒子污染的现象，鸡痘疫苗中存在传染性REV，会造成疫苗接种过程中的REV人为传播，从而导致严重的经济损失，这一现象应该引起疫苗生产厂家及养鸡场的高度重视，疫苗生产企业应严格使用SPF鸡蛋生产疫苗，疫苗产品必须严格进行REV污染的常规检测，养鸡场应严把接种鸡痘疫苗的质量关。’关键词：禽网状内皮组织增殖病毒：鸡痘病毒；基因分析：基因整合：疫苗安全性’Ⅱ山东农业大学硕士学位论文AbstractTheintegrationofavianreticuloendothliosisvirussequencesare

6、normallyfoundinFowlpoxvirusgenome．ThisphenomenionoccursnotonlyinFPVvaccinestrains，butalsoisolatedstrains，andhascausedextensiveconcernoftheresearchers．Toinvestigatethesituationandcontrasttheintegrationsequencesbetweenvaccinestrainsandfieldisolates，thefragmentsof5vaccinestrainsand14fieldisolatesofFP

7、VwereamplifiedbyPCR，thennucleotidesequencedandcomparedbyBLAST．TheresultsshowedthateachFPVfieldisolatecarriedanearlyintactREVprovirusintheirgenomesatthesamesite．Inaddition，thesefragmentsallsharedthehighesthomology