山东省灰霉病菌对常用杀菌剂敏感性监测及微孔板法检测技术研究

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1、山东农业大学硕士学位论文山东省灰霉病菌对常用杀菌剂敏感性监测及微孔板法检测技术研究姓名：杨晓楠申请学位级别：硕士专业：农药学指导教师：刘峰20120615山东农业大学硕士学位论文中文摘要灰霉病是蔬菜作物的重要病害之一，由其造成的经济损失严重。生产上以化学防治为主，但化学防治与病原菌群体产生抗药性的矛盾日益突出，及时进行快速高效的敏感性检测是灰霉病菌抗药性治理的必要程序。本文利用菌丝生长速率法测定了山东省不同地区灰霉菌株(Botrytiscinerea)对常用杀菌剂的敏感性，以期为田间选择农药提供依据。另外，微孔板法作为一种新型的检测方法，在某些病菌敏感性测定中展现出较高的应用潜

2、力。本文以灰霉病菌为研究对象，基于StammlerG．的微孔板法，通过与传统生测方法的比较，确立了一种快速、准确的杀菌剂室内生测方法，以实现对灰霉病菌敏感性的快速检测。1，从山东省23个番茄保护地分离得到138株灰霉病菌菌株，采用菌丝生长速率法测定了其对六种常用药剂及两种季铵盐阳离子杀菌剂的敏感性。结果表明各地灰霉菌株对多菌灵抗性频率达91．30％，其中高抗频率高达78．26％；对乙霉威的抗性水平较低，ECso值均小于10舭；灰霉病菌对异菌脲敏感性明显高于腐霉利，其中腐霉利的抗性频率达73．88％，异菌脲抗性频率为34．78％；供试菌株对嘧霉胺已普遍产生抗性，其抗性频率达到95

3、．65％。测定了53株灰霉病菌对C8．10和1227的的敏感性，ECso均值分别为12．984-10．70pg／mL和22．914-15．32pg／mL，可作为灰霉病菌对两种季铵盐阳离子杀菌剂的敏感基线。108株灰霉菌株对啶酰菌胺EC50均值为1．70士1．36pg／mL，可作为灰霉病菌对啶酰菌胺的敏感基线。2，利用酶标仪建立番茄灰霉病菌晟cinerea对杀菌剂敏感性的快速高效测定方法。以OD增加值作为评价指标，确立微孔板法检测灰霉病菌敏感性的测试条件，并对啶酰菌胺、嘧菌酯、乙霉威、甲基硫菌灵、异菌脲、苯醚甲环唑6种常用杀菌剂对灰霉病菌孢子萌发和菌丝生长的抑制效果进行评价，将结

4、果与孢子萌发法和菌丝生长速率法所得结论进行了比对。微孔板法测定条件为：酶标仪测定波长为630nm，测试培养基为灰霉孢子萌发刺激液(PDE)，孢子悬浮液浓度为8x105～1．6x106个／mL，培养条件为21℃黑暗条件下振荡(150r／rain)培养，孔中加入孢子悬浮液与药剂培养24h后作为药剂对孢子萌发抑制作用的测试时间，孔中孢子悬浮液培养12h后再加入药剂培养12．24h为药剂对菌丝生长抑制作用的测试时间。测试结果与孢子萌发法和菌丝生长速率法所得结论基本一致。用该方法测得啶酰菌胺对山东省三个地区57株灰霉病菌孢子萌发及菌丝生山东省灰霉病菌对常用杀菌剂敏感性监测及微孔板法检测技

5、术研究长的EC50均值分别为1．9311和5．6489肛g／mL。微孔板法综合了孢子萌发法和菌丝生长速率法的优势，测试速度快、结果准确、重现性好，具有良好的实用性。关键词：灰霉病菌；抗药性；敏感基线；微孔板法；测试条件ⅡAbs仃actGraymould,oneofmajorfungaldiseasesonvegetableandfruitcrops，Cancanseseverelossesofvegetables．Thecontrolofgraymouldreliesonapplicationofchemicalsynthesizedfungicides．Butthecontr

6、adictbetweenchemicalcontrolandoccurrenceofthefungalresistancetothefungicidesisstandingoutincreasingly．SoitisnecessarytotesttheresistanceofBotrytiscinereafastandefficiently．Inordertoprovidethebasisforfieldspraying，themyceliumgrowthratemethodWaSusedtodeterminethesensitivityof晟cinereastrainsfro

7、mdifferentareasofShandongProvincetocommonlyusedfungicides．Asanewmethodfordeterminatingthevirulenceoffurigicides，microtitermethodhasdemonstratedagoodpotentialintherelevantreports．BasedonthemicrotitermethodofStammlerG．，andcomparedwithtraditionalmetho