受体相互作用蛋白3在大鼠急性高眼压视网膜神经节细胞中表达变化的初步研究

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1、分类号——UDC密级编号十I初大学CENTRALSOUTHUNIVERSITY硕士学位论文论文题目：学科、专业：研究生姓名：导师姓名及其专业技术职称：受体相互作用蛋白3在大鼠急性高眼压视网膜神经节细胞中表达变化的初步研究生塑堂尚蕾黄菊芳研究员中南大学2012年5月分类号UDC硕士学位论文密级受体相互作用蛋白3在大鼠急性高眼压视网膜神经节细胞中表达变化的初步研究ThepreliminarystudyofReceptorInteractingProtein3expressiononretinalganglioncellsfollowingacutehi曲intraocularpre

2、ssure研究生姓名：尚蕾学科专业：学院(系、所)：指导教师：神经生物学基础医学院黄菊芳论文答辩日期z!兰堇=l生答辩委员会主席中南大学2012年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：戽学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门

3、规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。．作者签名缉导硕士学位论文中文摘要摘要目的：研究受体相互作用蛋白3(ReceptorInteractingProtein3，RIP3)在正常大鼠视网膜中的分布以及急性眼高压早期大鼠视网膜RIP3表达的时空变化，初步探讨急性高眼压早期导致视网膜节细胞损伤的可能分子机制。方法：(1)随机挑选6只健康的成年Sprague．Dawley大鼠，3只活取视网膜

4、组织匀浆后进行免疫蛋白印迹法检验抗体特异性，3只灌注取材之后冰冻切片进行抗体吸收实验和免疫组织化学染色以及RIP3与Neuron．specificnuclearantigen(NeuN，神经节细胞标志物)、Calbindin(CB，水平细胞标志物)、Glialfibrillaryacidicprotein(GFAP，星形胶质细胞标志物)、Glutaminesynthetase(GS，Mfiller细胞标志物)、ProteinkinaseCalpha(PKC．0【，双极细胞标志物、)、Parvalbumin(PV，无长突细胞标志物)、Rhodopsin(视细胞标志物)、Synap

5、tophysin(突触标志物、)、Integrin，alphaM(CDllb，小胶质细胞标志物)免疫荧光组织化学双标染色，分析RIP3在正常成年大鼠视网膜不同细胞类型中的表达分布；(2)j；Jt选18只健康的成年Sprague—Dawley大鼠按照存活时间随机分为6小时、12小时、24小时三个组，每组6只。一侧眼球进行加压处理、另一侧眼球作为白体对照，不作任何处理。高眼压侧眼球在眼前房插针加压，维持压力至110毫米汞柱1小时，下架存活至相对应的时间点后，每个小组随机取3只大鼠注射过量的麻药后冰上快速剥离视网膜组织，免疫蛋白印迹法分析RIP3的表达量。每组另外3只大鼠灌注取材用免

6、疫荧光染色分析RIP3在视网膜中的表达变化。结果：1．RIP3在正常成年大鼠视网膜中的免疫组织化学染色显示：神经纤维层和节细胞层染色最强，内核层染色强度较弱可见颗粒状细胞形态，内网层染色强度最弱，在外网层边缘部分可见少量染色较浅的RIP3阳性细胞分布，外网层未见明显阳性细胞染色，染色强度较弱；2．免疫荧光组织化学双标染色显示：在节细胞层，RIP3的阳性产物与NeuN阳性产物存在明显双标；在内核层靠近内网层边缘部分与部分PV阳性产物存在明显双标；在内核层靠近外网层边缘部分与部分CB阳性产物存在明显双标，此外，RIP3与PKC—Cc，GS阳性产物，GFAP阳性产物以及CDllb阳性

7、产物呈现微弱的双标；3．在本研究得到国家自然科学基金附o．81070729)以及高等学校博十!学科点专项科研基金mo．20100162110067)资助。I硕士学位论文中文摘要急性高眼压处理以后，Westernblot显示RIP3表达明显增强，表现为6小时、12小时的条带明显增粗，24小时条带较12小时弱；免疫荧光染色显示：急性高眼压损伤后，损伤组与正常对照组相比RIP3阳性染色分布未见明显变化，节细胞层的RIP3阳性染色明显较对照组强，其中12小时染色最强，6小时和24小时的染色强度较空白