组织因子靶向性纳米粒介导sirna靶向递送地研究

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1、AdissertationsubmittedtoHuazhongUniversityofScienceandTechnologyfortheDegreeofDoctorofMedicineTissueFactorTargetedNanopartclesMediatedsiRNATargetingDeliveryD.Candidate:ChenChenMajor:HematologySupervisor:HuYuHuazhongUniversityofScience&TechnologyWuhan430074,P.R.ChinaMay,20

2、14万方数据独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。学位论文作者签名：日期：2014年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论

3、文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在_____年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：2014年月日日期：年月日万方数据目录摘要…………………………………………………………………………………1Abstract…………………………………………………………………………………6前言………………………………………………………………………………………12第一部分载组织因子siRNA的EGFP-EGF1蛋白结合聚乙

4、二醇－聚乳酸－聚羟基乙酸纳米粒的构建及表征……………………………………………………………………141仪器和材料1.1仪器…………………………………………………………………………………151.2材料和试剂………………………………………………………………………162实验方法2.1大鼠TF-siRNA片段的筛选…………………………………………………………172.2载TF-siRNA的PEG-PLGA纳米粒的制备………………………………………………222.3EGFP-EGF1结合PEG-PLGA纳米粒…………………………………………………232.

5、4TF-siRNA-EGFP-EGF1-PLGA纳米粒的表征………………………………………232.5ENP和NP载siRNA的载药量和体外释放……………………………………………253实验结果3.1TF-siRNA的筛选……………………………………………………………………263.2载TF-siRNA的NP和ENP的表征……………………………………………………273.3TF-siRNA-ENP的免疫电镜……………………………………………………293.4TF-siRNA-ENP的EGFP-EGF1蛋白连接效率……………………………………293.

6、5载TF-siRNA纳米粒的载药量及包封率……………………………………………293.6TF-siRNA-ENP的体外释放……………………………………………………304讨论…………………………………………………………………………………31第二部分载组织因子siRNA的EGFP-EGF1蛋白结合聚乙二醇－聚乳酸－聚羟基乙酸纳米粒的靶向性及体外评价……………………………………………………………331仪器和材料1.1仪器………………………………………………………………………………………………34万方数据1.2材料和试剂……………………………………

7、……………………………………341.3实验动物……………………………………………………………………………352实验方法2.1大鼠BMECs原代细胞培养鉴定及体外损伤模型的建立和鉴定…………………362.2载TF-siRNA和香豆素-6的ENP和NP的制备…………………………………………382.3香豆素-6体外HPLC分析方法的建立………………………………………………382.4比浊法测定载香豆素-6纳米粒的浓度…………………………………………392.5香豆素-6的载药量和包封率………………………………………………………392.6大鼠BMEC

8、s对载siRNA和香豆素-6的ENP的摄取及siRNA的示踪………………402.7TF-siRNA-ENP对BMECs的毒性评价………………………………………………412.8TF-siRNA-