复合环孢菌素同种异体骨的实验研究

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1、硕士学位论文复合环孢菌素同种异体骨的实验研究硕士研究生：陆海波指导教师：裴国献摘要一、研究背景长期以来，临床上的骨缺损修复，特别是大段骨缺损的修复，一直是外科医生面l

2、缶的难题之一。用于骨缺损修复的材料主要有白体骨、同种异体骨及人工骨三类。其中同种异体骨由于其成骨性能及力学性能优于人工骨，而来源也不像自体骨那样受到限制，因而成为临床上应用最为广泛的骨修复材料。同种异体骨的l临床应用一直受到其免疫原性及疾病传播风险的制约。早些时候人们曾尝试着用柳硫汞等化学方法的处理来降低异体骨的免疫原性和对其进行灭菌，但效果不佳。随着制备工艺的改进，人们逐渐倾向于用深低温冷冻法

3、、冷冻干燥法及Y射线辐照来降低异体骨的免疫原性，其中Y射线辐照更兼具强大的灭菌功效。经过世界各国骨库几十年来的实践证明，上述方法能够很好地降低异体骨的免疫原性并有效地降低了因骨移植所致的疾病传播的风险，因而是目前最为常用的同种异体骨的制备方法．然而严格地讲，上述方法并不能完全消除同种异体骨的免疫原性，而经过上述方法处理后，同种异体骨的成骨性能及生物力学性能受到了明显的损害。致使目前为止临床上应用异体骨修复骨缺损的效果，特别是修复大段骨缺损的效果仍不能够令人满意。鉴于此，我们与许多研究者一样，希望对同种异体骨的制各方法进行新的探索。具体而言，就是在制备同种异体骨

4、的过程中复合环孢菌素，通过在局部中文摘要发挥环孢菌素强大的免疫抑制作用来代替深低温冷冻、冷冻干燥及Y射线辐照的降免疫原性作用，并用低温等离子体技术来代替Y射线辐照对异体骨进行灭菌，以期更好地抑制异体骨移植的免疫排斥反应，同时减轻制备过程中对异体骨成骨性能及力学性能的损害。另外，我们希望通过环孢菌素的局部应用来降低其药物副反应。二、研究目的初步验证复合环孢菌素并等离子体灭菌这一新的异体骨制备方法与深低温冷冻、冷冻干燥及Y射线辐照等方法相比，在抑制免疫排斥，促进骨愈合以及降低力学性能损害等方面的可行性甚至优越性。同时初步验证该方法的安全性。三、实验方法将新西兰兔分

5、为实验、对照及空白三组并制备兔桡骨中段段缺损模型。实验组植入复合环孢菌素的同种异体骨，对照组植入深低温冷冻／冷冻干燥辐照异体骨，空白组旷置。并分别在不同时间点于各组之间进行免疫学评价(包括手术局部状况的比较，外周血淋巴细胞亚群分析及cD25分子密度的比较)，成骨性能评价(包括x线评分及组织学量化分析)，以及生物力学评价(四点弯曲试验)。为了初步验证新方法的安全性，我们进行了体外细胞毒性及体内药物副反应等方面的比较。四、主要实验结果(一)免疫学评价1．手术局部状况的比较材料植入术后实验组及对照组动物的手术切口均一期愈合，伤口局部无红肿、渗液及化脓等情况出现。2．

6、外周血淋巴细胞亚群分析实验组与对照组CD4+T淋巴细胞百分数在不同时间点之间有显著性差异(辟11．980，P<0．001)；实验组各时间点之间无显著性差异(，-2．941，PⅡ硕士学位论文=O．067)，而对照组各时间点之间差异显著(F-23．425，P<0．001)。对照组在术后l周及4周持续下降，而到了术后16周却显著反弹达到峰值。两组CD4+T淋巴细胞百分数无显著性差异(f卸．984，P=O．345)；从各时间点看，术前l天及术后l周两组无显著性差异，P值分别为O．248及O．702，术后4周实验组显著高于对照组(f=6．906，P<0．001)，术后1

7、6周对照组显著高于实验组(f=．3．583，P=O．003)。实验组与对照组CDs‘r淋巴细胞百分数在不同时间点之间有显著性差异(P=4．586，P=O．009)；实验组各时间点之间无显著性差异(庐．860，P=O．180)，对照组各时间点之间有显著性差异(，．=3．733，P=O．035)。对照组从术前l天到术后4周呈下降趋势，而到术后16周又略有上升。两组cD8+T淋巴细胞百分数无显著性差异(，刍3．658，P=O．085)；从各时间点看，除了术后4周实验组显著高于对照组(成．413，P=0．033)外，其余时间点两组均无显著性差异(P>0．05)。实验组

8、与对照组CD4+T／CD8+T比值在不同时间点之间无显著性差异(，--2．397，P=O．130)；实验组各时间点之间无显著性差异(f卸．960，P=0．437)，对照组各时间点之间亦无显著性差异(F---4．402，P=O．076)。两组CD4+T／CDs+T比值无显著差异(，-：1．944，P=O．193)；从各时间点看，除了术后16周对照组显著高于实验组(t---2．533，P=O．030)外，其余时间点两组均无显著性差异(P>O．05)。3．CD25分子密度的比较对实验组与对照组骨缺损局部行CD25分子免疫组化染色可见，术后l周及4周两组局部阳性物质密

9、度大体相当，而术后16周，对照组局部的