邻二氮菲测定微量铁含量

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1、重庆医科大学2010级生物技术创新性实验第二小组邻二氮菲测定微量铁（重庆医科大学检验医学院2010级生物技术导师：易刚）作者：李海军李加本李良华李文伟沈俊捷李明义摘要：目的:利用邻二氮菲作显色剂测定样品中的微量铁并评价该方法的各项性能，熟悉研究工作的方法和步骤。方法：利用可见分光光度法中的标准曲线法，用邻二氮菲作显色剂，通过固定其他条件的方法来分析pH，时间，显色剂加入量对吸光度的影响。通过标准加样回收来检验方法的准确度，连续测定一份样品十次来验证方法的精密度。结果：结果显示显色环境在pH=4.9，波长509.

2、8nm时吸光度值最大，显色时间在5~60min内变化较小，显色剂用量对吸光度影响不大，回收率在98.70%~101.70之间，测定十份同一样品的标准偏差s=0.102，变异系数CV=s/x=0.462%，90%置信水平置信区间为22.03±0.059（ug/ml），99%置信水平置信区间为22.03±0.105（ug/ml）。铁离子浓度在0.1ug/ml~5ug/ml的线性超过0.9998。关键词：邻二氮菲微量铁测定分光光度法显色剂前言：铁是人体正常生理过程中不可或缺的物质，几乎任何组织都含有铁。缺铁性贫血是铁

3、缺乏最严重的疾病。铁过量是引发或加剧多种慢性疾病（如肿瘤、糖尿病、心血管疾病、神经退化性疾病以及慢性肝病等）的危险因素。目前常用的方法有磺基水杨酸分光光度法、1，10一菲罗啉分光光度法、EDTA配位滴定法测定铁离子含量1.材料方法1.1仪器：752型紫外可见分光光度计精密分析天平试剂：硫酸铁氨浓盐酸邻二氮菲盐酸羟胺醋酸醋酸钠乙醇1.2方法原理:在pH=3-9范围内邻二氮菲可与亚铁离子快速形成稳定的配合物比例为3：1，生成的配合物在510nm附近有一吸收峰，据报道其摩尔吸光系数为1.1×,反应灵敏且铁离子浓度与吸

4、光度符合朗伯比尔定律。本实验中使用NaAc：HAc=1：1的缓冲液，用盐酸羟胺还原样品中的铁离子1.3铁标准液的配制方法1mg/ml铁标准溶液的配制：准确称量0.4320gNH4Fe(SO4)2.H2O12至烧杯移取5ml1mol/L盐酸在烧杯溶解，转移至50ml容量瓶，摇匀，转移至试剂瓶。50ug/ml铁标准溶液的配制：用5ml移液管移取5ml的1mg/ml铁标准溶液和10ml1mol/L盐酸至100ml容量瓶1.4试剂的配制方法：醋酸钠缓冲液：16.41g醋酸钠，12.10g冰醋酸溶解至100ml蒸馏水中。

5、1mol/L盐酸溶液：移取10ml浓盐酸至100ml容量瓶定容移至试剂瓶。1.5g/L的1,10-邻菲啰啉：称量0.15g1,10-邻菲啰啉溶于5ml乙醇，加lml1mol/L盐酸，溶解至100ml蒸馏水中。10%盐酸羟胺溶液：称取盐酸羟胺10g溶解至100ml蒸馏水中。1.5检测步骤：重庆医科大学2010级生物技术创新性实验第二小组按顺序向50ml容量瓶中依次移入样品或铁标准溶液，盐酸羟胺溶液，醋酸钠缓冲液，邻菲罗琳溶液。加入显色剂前摇匀，加入显色剂摇匀并静置5分钟后测定其吸光度。1.5系列显色液：编号123

6、4567准液加入量（5ug/ml）0ml1ml2ml3ml4ml5ml10ml盐酸羟胺加入量1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml显色剂加入量5ml5ml5ml5ml5ml5ml5ml缓冲液加入量5ml5ml5ml5ml5ml5ml5ml浓度ug/ml00.10.20.30.40.51编号891011样品标准液加入量（50ug/ml）2ml3ml4ml5ml3ml盐酸羟胺加入量1ml1ml1ml1ml1ml显色剂加入量5ml5ml5ml5ml5ml缓冲液加入量5ml5ml5ml5ml5ml浓度ug/ml23

7、452.结果2.1显色时间：取10号溶液，用1号溶液作参比溶液用1cm比色皿，测定在1.2.3.4.5.10.30.60min时的吸光度变化。结果显示吸光度在5-20min稳定在5-60min内变化小于0.4%2.2显色剂用量：测定溶液在加入不同量的显色剂时的吸光度变化。可见显色剂的用量对吸光度影响不大。显色剂用量1ml3ml5ml10ml20ml吸光度A0.2240.2250.2240.2250.2292.3pH的影响：根据NaAc与HAc的不同比例配制缓冲液测定显色液在不同pH下的吸光度变化。结果显示pH对

8、吸光度影响较小且在pH=4.9时吸光度最大。由于ph范围较窄，平直部分不易区分，但吸光度在pH3.6~4.9的变化为1%，较小符合标准。重庆医科大学2010级生物技术创新性实验第二小组2.1吸收光谱：分别测定0.3ug/ml，1ug/ml，4ug/ml浓度铁溶液在400-600nm的吸收曲线确定吸收光谱并确定最大吸收波长为509.8nm。三种浓度的吸收光谱相同。2.2标准曲线：在pH4