血管紧张素ⅱ诱导内皮细胞血管生成的作用及机制研究

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1、万方数据中图分类号墼￡幽：垫UDC610硕士学位论文学校代码!Q三三3密级公珏血管紧张素II诱导内皮细胞血管生成的作用及机制研究TheeffectofAngIIonangiogenesisfromendothelialcells作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：王香临床医学内科学湘雅医院张国刚答辩委员会主垃中南大学二0一四年五月万方数据学位论文原创性声明YIIII12IIII116IIll8IIM5IM6811111161III本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进

2、行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：多书日期：塑!坚年』月羔日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人

3、允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：之垄导师签名万方数据血管紧张素II诱导内皮细胞血管生成的作用及机制研究摘要研究背景：心血管疾病是威胁人类健康的第一大杀手，而血管生成在心血管疾病的发生、发展过程中起着非常重要的作用。大量研究表明动脉粥样斑块内血管生成对动脉粥样硬化性疾病的进展和斑块的破裂起着非常重要的作用。有研究证实血管紧张素II可促进动脉粥样斑块的形成和主动

4、脉瘤的破裂；而在动脉粥样斑块区域和动脉瘤破口区，微血管富集；同时大量的研究亦表明血管紧张素II能够诱导各型内皮细胞的增值、迁移及血管生成。但血管紧张素II是如何促血管生成的呢，目前其作用机制仍不明确。然而，近来有研究证实缺血、OX．LDL、血管紧张素II等作为刺激因素均能诱发内质网的非折叠蛋白反应从而诱导内质网应激；在肿瘤和肾脏上皮细胞，非折叠蛋白反应尤其是IREl信号通路介导血管生成，其主要通过上调VEGF的表达诱导血管生成。故我们设想血管紧张素II是否通过ATl受体激活内质网应激的IREl通路上

5、调VEGF的表达从而诱导内皮细胞生成血管，并进一步探讨其中的具体机制。方法：(1)不同浓度的血管紧张素II(0nM、0．1nM、lnM、10nM、30nM)处理脐静脉内皮细胞24小时后，种于matrix胶，37℃孵育16．18小时，显微镜下观察并拍照；万方数据(2)不同浓度的血管紧张素II(0nM、O．1nM、lnM、10nM、30nM)处理脐静脉内皮细胞24小时后，收集胞浆蛋白，WesternBlot法检测GRP78、IREl、JNK蛋白水平的表达；(3)不同浓度的ATl受体拮抗剂氯沙坦(1uM、

6、3uM、10uM)、AT2受体特异性抑制剂PDl23319(10pM)N处NHUVECl小时后，再加入lnMAnglI处理24小时，及PDl23319(10pM)、氯沙坦(10uM)单独处理HUVEC24小时后，收集细胞，种于matrix胶，37。C孵育16．18小时，显微镜下观察并拍照；(4)氯沙坦(109M)、IREl特异性抑制剂irestatin9389(2．5pM)、JNK特异性抑制剂SP600125(109M)、p38MAPK特异性抑制剂SB203580(10pM)预处理HUVEC1小时后

7、，再加入lnMAngII处理24小时，收集细胞，matrix胶上行血管生成试验，显微镜下观察并拍照；(5)氯沙坦(109M)、irestatin9389(2．59M)、SP600125(10pM)、SB203580(10pM)预处理HUVEC1小时后，再加入lnMAnglI处理24小时，及lnMAnglI单独处理24小时后，收集胞浆蛋白，WesternBlot法检测GRP78、IREl、JNK、VEGF、p38MAPK的—-、

8、表达；(6)氯沙坦(109M)、irestatin9389(2．59M)

9、、SP600125(109M)、SB203580(109M)预处理HUVEC1小时后，再加入lnMAnglI处理24小时，及lnMAnglI单独处理24小时后，提取细胞RNA，采用半定量PCR检测GRP78、IREl、JNK的转录水平。¨T万方数据结果：(1)AnglI诱导内皮细胞的血管生成并触发内质网应激：AnglI(O．1nM、lnM、10nM、30nM)可促进内皮细胞血管生成，且呈抛物线样浓度相关性，以lnM时血管生成最为显著；与促血管生成效应一致，AnglI(