黑眉锦蛇igy表达特征分析

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1、万方数据CharacterizationoflgYintheThesissubmittedtoInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyYangWenlong(CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine)Supervisor：Prof．ZhaoYaofengQingdao，ChinaJune，2014万方数据学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包

2、含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。如不实，本人负全部责任。学位论文作者签名：夸童心签字日期。许年f月巧目学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：锄；也签字日期：>14t6月巧日导师签字：签字日期：D肛年∥月2

3、，日万方数据关于同意使用本人学位论文的授权书中国科学技术信息研究所是国家科技部直属的综合性科技信息研究和服务机构，是国家法定的学位论文收藏单位，肩负着为国家技术创新体系提供文献保障的任务。从六十年代开始，中国科学技术信息研究所受国家教育部、国务院学位办、国家科技部的委托，对全国博／硕士学位论文、博士后研究工作报告进行全面的收藏、加工及服务，迄今收藏的国内研究生博／硕士论文已经达到100多万册。学位论文是高等院校和科研院所科研水平的体现，是研究人员辛勤劳动成果的结晶，也是社会和人类的共同知识财富。为更好的利用这一重要的信息资源，为国家的教育和科研工作服务，在国家科技部的大力

4、支持和越来越多的专家学者提议下，中国科学技术信息研究所和北京万方数据股份有限公司承担并开发建设了《中国学位论文全文数据库》的加工和服务任务，通过对学位论文全文进行数字化加工处理，建成全国最大的学位论文全文数据库，并进行信息服务。本人完全了解《中国学位论文全文数据库》开发建设目的和使用的相关情况，本人学位论文为非保密论文，现授权中国科学技术信息研究所和北京万方数据股份有限公司将本人学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并进行信息服务(包括但不限于汇编、复制、发行、信息网络传播等)，同时本人保留在其他媒体发表论文的权利。论文题目：毕业院校：毕业时间：论文类型：博士论文口博

5、士后研究报告口硕士论文同等学力论文口授权人签字：日期：2014年月日万方数据毒岛农业丈学硕士掌童论文搞要黑眉锦蛇IgY表达特征分析摘要免疫球蛋白是适应性免疫的重要标志分子，它起源于有颌类的脊椎动物，广泛分布于鱼类、两栖类、爬行类、鸟类和哺乳动物。在此前对于黑眉锦蛇免疫球蛋白重链基因的研究中，发现其IgY存在]gYl和]gY2两种亚型。在对IgY血清表达特点的研究中发现两个问题，一是还原条件下不论是IgYl还是IgY2在血清中都表达长短两种形式，而且这两种形式不是由于糖基化造成的差异；二是非还原条件下血清中IgY似乎主要以多聚体形式存在，但检测到的多聚体的分子量与单体IgY

6、分子量的大小并不呈现倍数相关，我们推测IgY多聚体是缺少轻链的重链多聚体形式。针对这两个问题，我们进行了一系列的研究，并得出了一些结论。关于第一个问题，我们在mRNA水平利用3'RACE筛选了大量IgY克隆，并进行了可变剪接模式的检测，但没有发现IgY短链形式。基于上述实验，我们排除了RNA水平产生长短两种形式IgY的可能。随后，我们选取IgY2为主要研究对象，构建了pEGFP—C1和IgY2重链固定区的融合真核表达载体，将其转染DT40细胞，通过WesternBlotting鉴定其在蛋白水平是否也会同时表达长短链的形式，由于体内、体外环境和细胞系间的差异，我们并未模拟出

7、短链IgY2的表达。此外，我们还进行了多次蛋白质谱分析，但均没有找到短链IgY2断点的精确位置。关于第二个问题，我们首先克隆了蛇九轻链C区序列，并制备了多克隆抗体。我们对蛇血清和免疫共沉淀后的IgY2蛋白溶液在还原和非还原的条件下进行了系统的WesternBlotting实验，结果显示黑眉锦蛇血清中存在单体形式的IgY2，但表达量相对较低：IgY在血清中主要以多聚体形式存在，根据轻链和重链蛋白分子量的大小，我们推测IgY2多聚体是缺少了轻链的重链多聚体形式，这种特殊的免疫球蛋白与骆驼中VHH抗体类型类似。如果经过后续的研究工作