非小细胞肺癌分泌蛋白的定量研究

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1、万方数据硕士学位论文非小细胞肺癌分泌蛋白的定量研究QuantitativeProteomicAnalysesoftheSecretomeofNSCLC指导小组成员名单：姚明研究员闫明霞助理研究员该课题受基金资助：上海市科委科技发展基金项目编号：12140901501项目名称：人肺癌动物模型的生物学特性研究万方数据非小细胞肺癌分泌蛋白的定量研究目录ABsTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．-3一弓I言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．-5．第一部分·t血清蛋白组分析方法的初步建立⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一7-材料方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一8一结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．一13-讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一19一结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一20-第二部分：NSOt．O转移相关分泌蛋白的定量分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．-21-材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．一23-结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯-33一讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一48一结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．一50-第三部分：C0109表达■检测及生物功能的初步研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．-s1-材料方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．-52-结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．-55一讨{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一62-结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯-64一参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．一65一综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．-7l--爿}件⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．-80-致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．一8l-万方数据非小细胞肺癌分泌蛋白的定量研究摘要肺癌(1ungcancer)是全世界发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，非小细胞肺癌约占肺癌总数的80．85％，严重

5、影响人们的生活质量。目前，关于这类疾病的发病机理仍然不清楚，其发生、发展的分子机理亟待阐明。近年来质谱技术发展迅速，为肿瘤研究提供了有力的研究手段。本实验利用2DLC．MS／MS蛋白质组学平台，结合同位素标记相对和绝对定量(isobaricTagsforRelativeandAbsoluteQuantitation．iTRAQ)技术以及SWATHTM(SequentialWindowedAcquisitionofallTheoreticalfragmentions，SWATHTM)非标记定量技术分析比较一对具有不同转移潜能肺癌细胞系SPC．A．1sci和SPC．A．1的差异分泌蛋白，

6、筛选肺癌转移相关分子。第一部分：血清蛋白组分析方法的初步建立。利用安捷伦免疫亲和色谱系统有效去除人血清中14个血清高丰度蛋白，有利于下一步质谱鉴定出更多血清低丰度蛋白，为之后的实验研究奠定基础。去除高丰度蛋白后的血清，利用iTRAQ标记定量方法定量比较正常人与肺癌早期、中期及晚期病人的血清蛋白。第二部分：NSCLC转移相关分泌蛋白的定量分析。利用iTRAQ标记定量技术和SWATHTM非标记定量技术同时分析SPC-A-lsci和SPC．A．1的差异分泌蛋白，并分析、整合两种方法的定量效果，结果显示在两种方法中重复鉴定与定量的蛋白有326个，差异表达的蛋白110个，经过生物信息数据库软件

7、预测，有96％的蛋白可通过分泌途径分泌。应用实时定量PCR(QuantitativeReal．timePCR,qRT-PCR)与蛋白质印迹法(Westernblot)检测差异蛋白在基因与蛋白水平的表达情况，结果与质谱定量趋势基本一致。此外，运用第一部分中蛋白组学分析血清的方法，比较早期肺癌病人组(I和II期)和晚期肺癌病人组(III和IV期)的血清差异蛋白，共鉴定差异蛋白71个。ELISA检测质谱鉴定结果中差异最显著的蛋白(ComplementC3)在血清