中药ybf抗hiv-1的实验研究

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1、北京工业大学硕士学位论文中药YBF抗HIV-1的实验研究姓名：王晓艳申请学位级别：硕士专业：生物物理学指导教师：温瑞兴20080501摘要摘要艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyVirus，HIV)感染所导致的以全身免疫系统的严重损害为特征的，患者易于发生机会性感染以及肿瘤为特征的临床综合征。全球约95％以上的HIV感染是由HIV．1造成的。自1981年美国报道首例艾滋病患者以来，全球已有超过2500万人死于艾滋病。迄今为止，经美国FDA批准的用于治疗艾滋病的药物共有29种(包括复方制剂)，根据它们的作用机制可将其归划为5大类：核

2、苷类逆转录酶抑制剂、非核苷类逆转录酶抑制剂、整合酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、融合抑制剂。目前，临床上治疗艾滋病主要采用高效抗逆转录病毒疗法(HighlyActiveAnti．RetroviralTherapy，KAART)，该疗法可减少患者体内的病毒载量，延长患者生命。但由于这些药物均是由化学合成的方法获得，具有价格昂贵，毒副作用强，耐药性不断发生，不能彻底清除人体内的HIV等缺点，因而在一定程度上限制了其的应用。而天然产物具有结构多样性、生物活性多样性、较低的毒副作用以及广泛的来源等特点，在研发新药及药物先导化合物中发挥越来越重要的作用。本课题的研究内容是：从中药Y

3、BF的粗提物开始，研究其对HIV．1的抑制活性，在体外药效学活性检测指导下对其进行提取分离纯化，直至找出其抗HIV一1的有效部位或有效群体，以期达到分离出YBF抑制HIV一1活性的有效部位。药物提取与分离部分的实验方法主要包括柱层析(ColumnChromatography)和薄层层析(Thin-layerChromatography，TLC)；体外药效学检测的方法包括细胞病变观察法(CPE)和p24抗原检测法；药物作用机理的研究主要采用Biacore技术检测药物与靶点蛋白的结合情况。本实验所用的细胞株为MT4细胞，病毒株为HIV．1HIB。通过实验得出结论：YB

4、F30％乙醇提取物比其他不同浓度的乙醇提取物抗HIV作用更好；对其做进一步的分离纯化，得到最后的两个有效部位A302、B6；经p24法检测A302在125txg／mL的浓度下对HIV一1的抑制率为74．8815％，B6在1251xg／mL的浓度下对HIV．1的抑制率为73．7115％，计算得出它们的治疗指数分别为：41．22、43．59，均大于10，因此A302、B6可以作为抗HIV．1的药物做进一步的研发。对于作用靶点的研究，本研究采用Biacore技术检测了A302、北京Tqk人学理学硕七学位论文B6的与Vif蛋白的结合情况，在20rtg／mL的浓度下，A30

5、2与Vif的结合量为69．6RU，B6与Vif的结合量为59．7RU，提示Vif可能为二者的作用靶点之一。本课题采用体外药效学活性指导下的药物提取分离模式，有针对性地寻找中药YBF抗HIV一1的活性部位，阐明了中药YBF抗HIV．1活性的物质基础，为中药YBF在抗HIV．1方面的进一步研究开发提供了依据和基础。关键词艾滋病病毒；中药YBF；细胞病变观察法；p24抗原检测法；BIA技术IIAbstractAquiredImmuneDeficiencySyndrome(AIDS)，whichisacollectionofsymptomsandinfectionsres

6、ultingfromthespecificdamagetotheimmunesysteminhuman，iscausedbyhumanimmunodeficiencyvirus(HIV)．AIDSpatientsoftenhaveailincreasedriskofdevelopingopportunisticinfectionsandtumors．HIV一1isthesourceof95％HIVinfectionsthroughouttheworld．SinceAIDSWasfirstreportedintheUnitedStatesin1981，thereha

7、vebeenmorethan2．5millionpeoplediedofAIDSthroughouttheworld．Sofar，theFoodandDrugAdministration(FDA)hasapproved29(includingfixed—dosecombinations)drugsfortreatingHIVinfection，whichcanbedividedinto5categoriesbasedontheirmechanismsofaction：nucleoside／nucleotidereversetranscriptaseinhibito

8、rs，no