凝固酶阴性葡萄球菌分子鉴定以及路邓葡萄球菌和解糖葡萄球菌的研究

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1、军医进修学院解放军总医院硕士学位论文凝固酶阴性葡萄球菌分子鉴定以及路邓葡萄球菌和解糖葡萄球菌的研究姓名：刘朝军申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：沈定霞2012-05-15军医进修学院硕士学位论文题目：凝固酶阴性葡萄球菌分子鉴定以及路邓葡萄球菌和解糖葡萄球菌的研究中文摘要·凝固酶阴性葡萄球菌的快速分子鉴定目的建立常见凝固酶阴性葡萄球菌(CoagulaseNegativeStaphylococcus，CNS)的快速分子鉴定方法。方法对15种临床常见CNS进行PCR扩增和gap基因测序，构建进化树进行同源分析，同时与16SrRN

2、A基因比较。结果l5种常见CNS中，gap基因相似率介于39％一94％；16SrRNA基因相似率介于96％-99％，至少2种细菌99％以上相似率，最多4种葡萄球菌99％以上相似率。进化树同源分析显示，两种方法在检测缓慢葡萄球菌与松鼠葡萄球菌和产色葡萄球菌与中间葡萄球菌时，都有很高的可信度；而对于其它细菌，gap基因同源分析有较少的不可靠信度(42％，56％)，16SrRNA基因同源分析有较多不可靠信度(41％、44％、51％、55％、64％)。结论gap基因序列分析能够对15种常见CNS进行准确鉴定，同源分析可信度要明显优于16SrRN

3、A基因。·路邓葡萄球菌的实验研究目的研究路邓葡萄球菌临床分布特点及耐药情况。方法首先用鸟氨酸脱羧酶和吡咯烷酮芳基酰胺酶对670株CNS进行鉴定，然后用APl20Staph和VITEK2GP对两者阳性菌株鉴定，最后hqgap基因进行最终鉴定；药敏鉴定采hqK-B法，并分别检测ermA、ermB、ermC和mecA耐药基因；分子流行分析采用PFGE方法。结果共检出5株路邓葡萄球菌(o．7％)，3株细菌对红霉素、克林霉素和青霉素耐药，携带ermC基因；1株细菌对头孢西丁和青霉素耐药，携带mecA基因；l株细菌没有产生耐药。PFGE聚类树状图分

4、析显示，同源性96．6％两株细菌，来自于骨科，同源性96．0％的两株细菌，分别来自胎膜早破和新生儿病人，与其它细菌相似度87．3％以下1株细菌来自门诊。结论路邓葡萄球菌的检出率相对低，主要以多重耐药为主，PFGE分析能够为该茵的流行特征提供信息。·从骨髓中分离鉴定解糖葡萄球菌目的建立解糖葡萄球菌的快速分子鉴定。方法采用洗糊加热裂解法从阳军医进修学院硕士学位论文性血培养瓶中提取DNA，对细菌进行PCR扩增和gap基因测序，构建进化树进行同源分析，同时用E．test方法进行药敏试验。结果gap基因序列分析显示，与该细菌99％以上相似率有解糖

5、葡萄球菌1种，且该菌与解糖葡萄球菌具有高度同源(bootstrapin9100％)，E—test实验MIc结果万古霉素1．5p．g／mL、青霉素0．0021ag／mL、克林霉素0．023I，tg／mL、左氧氟沙星O．0941．tg／mL和甲硝唑256弘咖L。结论洗涤／uU加热裂解法提J

6、V．DNA和gap基因序列分析，能够及时准确鉴定解糖葡萄球菌。关键词：凝固酶阴性葡萄球菌；路邓葡萄球菌；解糖葡萄球菌；16SrRNA；gap；E．test2军医进修学院硕士学位论文Title：MolecularIdentificationofCoagul

7、aseNegativeStaphylococcusandtheStudyofStaphylococcuslugdunensisandStaphylococcussaccharolyticusAbstractChapter1RapidmolecularidentificationofCoagulaseNegativeStaphylOCOCCUSObjectiveToestablishtherapidmoleculardiagnosisofCoagulaseNegativeStaphylococcuswhichwereencountered

8、frenquentlyinclinicalinfection．MethodsDNAsequencingof15typiesofCNSwereobtainedwithgapgene．Afterthealignmentgapgenesequences，thebacteriawereidentifiedwithhomologicalalignmentcomparedwiththe16SrRNAgene．ResultsThesequencesimilarityofthegaprangedfrom39％to94％．Thesequencesimil

9、arityofthe16SrRNArangedfrom96％to99％，atleasttwospeciesofbacteriapossessedsimilarrateof99％andthemostfours