利用原核显微注射技术制备vegf164转基因小鼠及其检测

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1、学校代码!垒12鱼分类号学号编号论文题目利用原核显微注射技术制备VEGFI64转基因小鼠及其检测GENERATION0FVEGF164OVEREXPI也SSIONTRANSGENICMICEBYPRONUCLEARMICROⅣJECTIONANDITSDETECTION学院：生盒型堂堂院专业：动物堂研究方向：生殖生物堂及生物技丕姓名：韭盍鹏指导教师：郭旭丕：．副研究员二零一四年四月原创性声明本人声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除本文已经注明引用的内容外，论文中

2、不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得f5l莹直太堂及其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：在学期间研究成果使用承诺书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：内蒙古大学有权将学位论文的全部内容或部分保留并向国家有关机构、部门送交学位论文的复印件和磁盘。允许编入有关数据库进行检索，也可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编学位论文。为保护学院和导师的知识产权，作者在学期

3、间取得的研究成果属于内蒙古大学。作者今后使用涉及在学期间主要研究内容或研究成果，须征得内蒙古大学就读期间导师的同意；若用于发表论文，版权单位必须署名为内蒙古大学方可投稿或公开发表。学位论文作者签名：猛鹂指导教师签名：二弛内蒙古大学硕：I：学位论文利用原核显微注射技术制备VEGFl64转基因小鼠及其检测摘要血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)是一种二聚体糖蛋白，由二硫键连接而成，是血小板衍生性生长因子(PDGF)家族的一员，具有促进毛囊发育和毛发生

4、长的作用。为深入研究VEGF基因对毛囊的作用，本实验利用原核显微注射法制作VEGFl64转基因小鼠，通过PCR筛选得到转基因阳性小鼠。通过实时荧光定量PCR法检测转基因小鼠皮肤VEGFmRNA的相对表达量；通过WesternBlot检测VEGF蛋白的表达水平；通过石蜡切片的方法检测小鼠皮肤毛囊的数量和形态。1．利用原核显微注射技术制备转基因小鼠转基因小鼠是研究基因调控、个体发育和疾病的重要实验动物。原核注射技术在小鼠转基因中应用十分广泛而且非常成功，主要步骤包括外源基因的准备、原核期胚胎的获得、原核显

5、微注射、胚胎移植等。本实验利用原核显微注射法制备了K14／VEGF和KAP6．1／VEGF转基因小鼠59只和87只，得到阳性小鼠各5只，阳性率分别为8．5％和5．8％，经过传代FO代阳性小鼠均能够把外源基因稳定遗传给子代。实验成功建立VEGFl64转基因小鼠模型。2．K14／VEGF和KAP6．1／VEGF转基因小鼠的检测实验利用实时荧光定量PCR、Westernblot、石蜡切片等技术检测转基因阳性小鼠和同窝对照组小鼠。经检测，转基因阳性小鼠与同窝对照小鼠相比，VEGF1mRNA表达量最高达6．25

6、倍(K14ⅣEGF)和6．67倍(KAP6．1／VEGF)，蛋白质表达量最高达1．68倍(K14／VEGF)和1．64倍(KAP6．1／ⅦGF)，石蜡切片显示阳性小鼠毛囊直径和数量明显增加。表明血管内皮生长因子具有促进毛囊生长的作用。关键词：原核显微注射；转基因小鼠；血管内皮生长因子：毛囊内蒙古大学硕士学位论文GENERATION0FVEGF164OVEREXPRESSIONTRANSGENICMICEBYPRONUCLEARMICRoINJECTIONANDITSDETECTIONABSTRACTV

7、ascularendothelialgrowthfactor(VEGF)isadimericglycoprotein，whichislinkedbyadisulphidebound．VEGFisalsoamemberoftheplateletderivedgrowthfactors(PDGFs)family．Theproteinplaysanimportantroleinthedevelopmentofhairfolliclesandthegrowthofhairfibers．Tofurtherinv

8、estigatethegene’Sfunction，inthisstudyweproducedVEGFl64transgenicmicebypronuclearmicroinjectionmethod，andthepositivetransgenicmicewerescreenedbypolymerasechainreaction(PCR)assay．TherelativeexpressionquantitiesofVEGFmRNAweretestedb