四君子汤对慢性心衰大鼠心肌组织蛋白质组学影响的研究

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1、广州中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名日期：年月日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权广州中医药大学可以将本学位论文的全部或部

2、分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名日期：年月论文导师签名日摘要目的：1．通过观察四君子汤对心衰模型大鼠心功能和心肌组织蛋白组学表达的影响，探讨四君子汤治疗慢性心衰的机理；2．通过研究益气健脾中药四君子汤对心衰大鼠模型心肌组织蛋白质组学的影响，以期为中医“心脾相关”理论提供一定的分子生物学证据。方法：1．动物模型制备选取SD雄性大鼠42只，随机留取6只作为空白对照组，其余36只采用腹主动脉缩窄法构建心衰模型，常规喂养8周，通过多导生理记录仪检测大鼠左室舒张

3、压(LVEDP)，若LVEDP≥15mmHg，则说明慢性左心衰大鼠模型建立成功。空白组大鼠以同样方法打开腹腔，但不进行腹主动脉缩窄。术后大鼠予肌肉注射青霉素l周(50000U／只)，预防感染。2．分组及给药方法腹主动脉缩窄术后大鼠死亡13只，存活23只，随机抽取一只检测血流动力学，将剩余22只造模大鼠随机分为模型组5只、卡托普利组5只、四君子汤高剂量组6只、四君子汤低剂量组6只。按实验方案灌胃给药1月，四君子汤高剂量组按11．889生药／(kg·d)给药、四君子汤低剂量组按2．97g生药／(kg·d)给药，卡托普利组按lOOmg／(kg·d)给药

4、，空白组和模型组分别予相同体积生理盐水灌胃。3．检测项目及方法游离右颈总动脉，把充满肝素的塑料导管逆行插至左心室，另一端接多媒体生物信号记录仪，测定如下血流动力学指标：左心室收缩压(LVSP)，左心室舒张压(LVEDP)，左心室内压上升最大速率(+dp／dt)、下降最大速率(-dp／dt)，心率(HR)。称重后腹腔注射麻醉，迅速处死大鼠并取出心脏，用低温生理盐水数次冲洗，用滤纸吸干多余水分，剪去左右心房和血管组织，从室间隔分离左右心室并分别用电子天平称取重量，左右心室质量分别除以体重得左心室质量指数(LvMI)、右心室质量指数(RvMI)。在测得

5、相关数据后，取一部分左心室心肌组织用10％福尔马林固定，制作病理组织切片，用光镜观察心肌细胞和心肌间质的变化，并摄片对比。4．蛋白质组学分析分别提取慢性心衰大鼠模型四君子汤高剂量组和模型组等量左心室组织，经研磨、提取、纯化后采用双向凝胶电泳分离心肌蛋白，分别进行银染和考染，扫描凝胶，利用图像软件分析差异蛋白，并选择有显著差异的蛋白点进行胶内酶切和质谱鉴定。利用BioTools软件搜索NCBT数据库，寻找并确定差异蛋白质。结果：1．模型组心功能较其他各组降低，左心室质量指数增加(与空白组比较P

6、有显著差异，四君子汤高剂量组可明显改善心衰大鼠心功能，心室质量指数与模型组比较(P

7、胶作为参考胶，其余胶与之匹配，平均匹配率为(80．4±1．9)％。四君子汤组与模型组相比较，表达明显差异的点共59个，其中四君子汤高剂量组表达明显增强的点有31个，模型组表达明显增强的有28个。各选取9个差异显著(Volume值相差≥1．5倍)的蛋白点进行质谱鉴定，通过整合去重，鉴定出5种蛋白。与模型组比较，四君子汤高剂量组表达下调的蛋白有2个：丝氨酸蛋白酶抑制剂A3N(SerineproteaseinhibitorA3N)、丙酮酸脱氢酶复合体(Pdhxprotein)。与模型组比较，四君子汤高剂量组表达上调的蛋白有3个：Sucl92蛋白(Suc

8、l92protein)、线粒体肌酸激酶(CreatinekinaseS—type，mitochondrial)、肌球蛋白轻链2(myos