蚊杀虫剂表皮抗性的初步研究

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1、分类号：R384．1密级：题单位代码：学号：1031220111065南京医科大掌硕士学位论文研究生：指导教师：学科专业-i学院名称：完成时间：方福瑾朱昌亮教授病原生物学基础医学院．-0』四年五月南京医科大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：弋高焉日期：p／够年6

2、月ffE1日期咖代年B月(1日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应方框内打“√”)：1、保密口，在年解密后适用本授权书。2、不保密口。日期：pfo年G月【旧日懒必年G月I【日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文

3、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．5丹Ⅱ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．)材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7l实验蚊⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯72主要试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯83主要仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．10l淡色库蚊种群选取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．102淡色库蚊RNA提取和cDNA合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．113引物设计、合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．134实时荧光定量PCR反应⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯145诱导实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．166淡色库蚊Unigene3941』ll基因克隆⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯167生物信息学分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯．238基因微注射抑制Unigene3941-AU基因表达后对蚊敏感性的影响⋯249统计分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．25结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯261蛋白质组和转录组中鉴定出的表皮蛋白⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．262表皮蛋白和几丁质合成酶I在实验室抗性、敏感品系中的表达⋯．．263表皮蛋白和几丁质合成酶I在现场抗性、敏感品系中的表达⋯⋯一294溴氰菊酯短期诱导表皮蛋白与几丁质合成酶I表达分析⋯⋯⋯⋯．．355淡色库蚊Unigene39

6、41-An全长基因克隆与生物信息学分析⋯⋯⋯406基因微注射对淡色库蚊溴氰菊酯敏感性的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．41讨{念⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．53综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯60攻读学位期间发表文章情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．76致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．77南京医科大学硕士学位论文蚊杀虫剂表皮抗性的初步研究中文摘要背景：化学防制一直是蚊媒综合防治的主要方法。杀虫剂长期、大量使用，导致了蚊抗药性。本研究旨在探讨昆虫表皮蛋白(insectcuticleproteins，ICPs)和几丁质合成酶I(chitinsynthaseI，CHSI)在蚊抗药性中的作用。方法：选择淡色库蚊抗药性蛋白质组与转录组共同鉴定的差异表达表皮蛋白；采用qRT-PCR方法，分别比较淡色库蚊实验室和现场种群的敏感与抗性品系的ICPs和CHSI表达差异；以溴氰菊

8、酯诱导淡色库蚊，对诱导前后ICPs和CHSI的差异表达进行了定量检测；克隆主效基因Unigene3941All全长序列，并进行同源性比对与进化树分析；采用基因微注射方法验证主效基因Unigene3941All的功能。结果：淡色库蚊实验室和现场种群敏感与抗性品系的14个表皮蛋白