转fat-1基因牛外源基因整合位点鉴定

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1、学校代码：分类号：10126论文题目学号：编号：31108028转fat．1基因牛外源基因整合位点鉴定IDENTIFICATIoNoFTHETRANSGENICINTEGRATIoNSITEINFAT-1TRANSGENICCATTLE学院：生命科学学院专业：动物学研究方向：生殖生物学及生物技术姓名：于超然指导教师：李光鹏2014年5月本研究由国家"973"计划课题“克隆与转基因克隆动物机研究(2012CB22306)，，国家科技重大专项高产优质转基因肉牛新品种培育(3013ZX08007．002)”支持内蒙古大学硕士学位论文转fat-1基因牛外源基因整合位点鉴定摘要临床医学研究表明，n一3

2、多不饱和脂肪酸(n．3polyunsaturatedfattyacids，n一3PUFAs)对人类健康十分重要，而高水平的n一6多不饱和脂肪酸(n一6PUFAs)对人体是有害的，常与癌症、心脑血管疾病以及部分精神疾患的发生有关。因此，在日常饮食中，摄入的n．3和n．6PUFAs的比例维持在1：1是十分重要的。针对目前n一3PUFAs来源有限的状况，利用转基因家畜提供n．3PUFAs可能是一种有效的方法。在本研究中，将fat-1的蛋白质编码区序列按照哺乳动物密码子的偏好进行优化，构建表达载体，利用体细胞核移植技术生产fat一1转基因牛。本试验使用接头介导PCR法对转基因牛ZK002的fat．1

3、侧翼序列进行分析，利用RealtimePCR技术检测了外源基因的拷贝数并检测整合位点周边基因的表达情况。此外，还分析并比较了该牛8种组织中的fat．1的表达情况，以及在肌肉、脂肪和肝脏3种组织中与脂肪合成代谢相关基因的表达情况。结果表明：fat-1基因插入到6号染色体上，拷贝数为2个，整合位点邻近基因的表达受到影响；在8种组织中fat．1均有表达，n．3PUFAs在37种脂肪酸所占比例提高，n一6／n一3PUFAs比值下降；在肌肉、脂肪和肝脏中与脂肪合成相关基因FANS和ACC的表达下调。本研究初步建立了利用LM．PCR确定转基因牛外源基因的整合位点的检测体系，为今后转基因动物的研究奠定基础

4、。关键词：侧翼序列、接头介导PCR、n一3多不饱和脂肪酸、n．6多不饱和脂肪酸。于超然转fat．1基因牛外源基因整合位点的鉴定IDENTIFICATIONoFTHETRANSGENICINTEGRATIoNSITEINlWBlTRANSGENICCATTLEABSTRACTClinicstudieshaveshowedthatlong--chainomega--3polyunsaturatedfattyacids(n一3PUFAs)havebeneficialeffectonhumanhealth，whilehighlevelsofn一6PUFAsinhumanbodiesareclosel

5、yrelatedtocertaindiseasessuchascancer，cardiovasculardiseasesandvariousmentaldisorders．Arationalbalancedlevelofn-6andn-3fattyacidsisimportantandtheidealn-6／n一3ratiois1：1．Alternativeresourcesofn一3PUAFscreatedbytransgenicdomesticanimalswouldbeaneconomicapproach．Inthisstudy,fat-lgene．fromCaenorhabditis

6、elegansencodingann一3fattyaciddesaturase，washumanizedmodificationandconstructedtransgenicvectors．Thetransgeniccattlewerecreatedbysomaticcellnucleartransfer．Inordertoexaminetheinsertionsiteandcopynumberofforeignfat-1inthetransgenicfounders，theligation—mediatedPCR(LM—PCR)，alaboratory—savedmethod，wasus

7、edtoidentifytheintegratedfat-1gene．Theresultsshowthat，inZK002，thefat-lgeneisintegratedintochromosome6withonecopy．Theexpressionsofthegenesadjacenttothefat一1transgeneinthesamechromosomeweresignificantlyaffect