α-乳香酸抗急性髓细胞白血病血管新生的实验研究

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1、万方数据中图分类号酲』』UDC610博士学位论文学校代码!Q§三三密级公珏Q一乳香酸抗急性髓细胞白血病血管新生的实验研究ExperimentalStudyof0【一boswellicacidsanti··angiogenesisthroughVEGF-·signalpathwayinacutemyeloidleukemia作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：张勇临床医学内科学湘雅医院齐振华教授论文答辩日期2Q!三二!!二2三答辩委员会主席中南大学二零一三年十一月一奢一二，平T一月学位论文原创性声明删y2删684794

2、万方数据本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：日期：j4年上月竺日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件

3、和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：租导师签名缓日期：j型≥年上月!／日日期：盟年』月竺日万方数据博士学位论文中文摘要摘要民间应用乳香树脂提取物治疗多种不同慢性炎症性疾病已经很长时间了。来自动物模型及人体的实验数据已经确认乳香树脂提取物不仅具有治疗炎症性疾病的能力，同时具有抗肿瘤效能。对树脂提取物成分的分析揭示五环三萜类化合物乳香酸具有多种生物学活性及药理学作用。在阐明乳香酸类化合物(

4、boswellicacids，BAs)生物效应分子机制的研究中发现5．LO、人白细胞弹性蛋白酶、端粒酶I和端粒酶II以及激肽酶是BAs作用的靶标，而且根据细胞类型及结构不同，BAs在不同细胞分别影响炎症反应及肿瘤生长信号传导途径，包括Ca2+，MAPK信号肽。基于在中医及印度民间医药中观察到的一些效果，科学家们开展了许多动物试验及在受试人进行了临床试验。在动物模型上，BAs单体或包含了很多种成分的置spec提取物，都显示具有潜在的治疗炎症疾病(风湿性关节炎、骨关节炎、自身免疫脑脊髓炎、回肠炎、结肠炎、肝炎等)、疼痛、高脂血症、高胆固醇血

5、症、过敏反应等药理学效果。实际上，在人体的研究亦显露出其能干预风湿性关节炎、骨关节炎、脑及其他肿瘤、溃疡性结肠炎、Crohn7s病及支气管哮喘的潜能。国内外学者研究乳香酸类化合物抗白血病作用，主要集中在促进白血病细胞分化及诱导凋亡、抑制肿瘤细胞的增殖，而有关调节微血管新生方面的研究尚未见报道。本次研究对于进一步深刻了解乳香提取物及其单体乳香酸类化合物的药理作用机制具有比较深远的意义，对于中药的开发及临床广泛推广应用亦会产生万方数据博士学位论文中文摘要积极的影响。目的①阐明临床急性髓细胞白血病患者体内血管新生与分型、预后、浸润的关系以及与

6、血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)的相关性。②研究乳香单体u．乳香酸对白血病细胞株HL一60细胞增殖的影响，对HL．60细胞VEGF及其受体(FLt．1和KDR／FLK-1)表达的影响。③通过体内试验，研究仅．乳香酸对体内白血病细胞分泌VEGF的影响，以及对骨髓微血管新生的作用。方法①收集骨髓液，分离单个核细胞(monocyte，MNC)，免疫组化检测急性白血病患者骨髓单个核细胞内VEGF蛋白的表达；②取骨髓活检组织，石蜡包埋、切片后免疫组化染色检测骨髓微血管密度；③MTT试

7、验检测Q一乳香酸对白血病细胞体外增殖的影响；④Real．timePCR检测Q一乳香酸对VEGF及受体(FLT．1及KDR／FLK-1)mRNA表达的影响；OWestemBlot法检测Q．乳香酸对细胞VEGF及其受体蛋白表达的影响；⑥3Gy60Co射线照射BALB／C裸鼠，通过注射HL一60细胞构建急性白血病动物模型；⑦组织病理学检查及染色体G显带法鉴定白血病动物模型；⑧ELISA法检测不同剂量a一乳香酸处理组模型裸鼠血浆VEGF浓度的变化；⑨免疫组化染色检测各组裸鼠骨髓微血管密度(microvesseldensity，MVD)。结果①初

8、治急性髓性白血病(acutemyeloidleukemia，AML)患者和对照组骨髓组织中的微血管密度分别为：30．03±4．37／hotspot和9．85+3．44／hotspot，AML患者显著高于正常