pi3kakt信号通路在硫化氢影响肝星状细胞增殖、凋亡中的作用

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1、分类号：密级：学号：2010109095单位代码：10759石河子大学硕士学位论文PI3K/Akt信号通路在硫化氢影响肝星状细胞增殖、凋亡中的作用学位申请人任嫱指导教师郑勇教授申请学位门类级别医学硕士学科、专业名称内科学研究方向门脉高压症的研究所在学院医学院中国·新疆·石河子2013年5月TheroleofPI3K/AktsignalingpathwayinhydrogensulfideinfluencetheproliferationandapoptosisofhepaticstellatecellsADissertationSubmittedtoShi

2、heziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByRenQiang(Medicine)DissertationSupervisor:Prof.ZhengYongMay,2013摘要目的：探讨硫化氢（H2S）、LY294002对大鼠肝星状细胞增殖、凋亡的影响，研究PI3K/Akt信号通路在H2S影响大鼠肝星状细胞(HSC)的增殖、凋亡中的作用，探讨H2S是否通过PI3K/Akt信号通路延缓肝纤维化的发生。方法：(1)HSCT6细胞的培养：以10

3、%胎牛血清DMEM(高糖)培养基培养，接种后6-8h细胞贴壁，24h-48h换液，72h增殖达生长面积90%消化传代，细胞传代周期稳定用于实验。(2)MTT法检测HSCT6细胞-1的增殖：分对照组与实验组，实验组按照加药浓度梯度分组：NaHS组分别按照25µmol·L、-1-1-1-1-150µmol·L、75µmol·L、100µmol·L、200µmol·L浓度梯度给药，LY294002组分别按照25µmol·L、-1-1-150µmol·L、75µmol·L、100µmol·L的浓度梯度给药，均干预48小时，加入MTT20µl暗处反应4小时，加入DM

4、SO150µl终止反应，使用酶标仪于570nm波长处检测各孔吸光度（A）值。（3）流式细胞技术检测H2S与LY294002对HSCT6细胞凋亡的影响：分5组，正常对照组（N）、DMSO组（D）、-1-1-1-1NaHS50µmol·L组（S）、LY29400250µmol·L组(LY)、LY29400250µmol·L+NaHS50µmol·L组(LYS)，采用流式细胞仪经AnnexinV—FITC／PI双染检测各组细胞HSCT6细胞的凋亡率；同等实验条件，Hoechst33342染色，倒置荧光显微镜下观察并计算HSC-T6细胞的凋亡率。（4）PCR法检测

5、HSCT6细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达：实验分N组、D组、S组、LY组、LYS组，提取HSC-T6细胞中总RNA，PCR法检测细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达。结果：（1）HSC生长良好，传代周期稳定，总体死亡率<5%，倒置显微镜下观察细胞形态，可见S组细胞密度增大，LY组细胞增殖不明显，可见凋亡细胞，细胞体积缩小。（2）按实验组干预HSC-T6-1-1-1细胞培养48h后，与对照组相比，低浓度NaHS（25µmol·L、50µmol·L、75µmol·L）促进HSC-T6-1细胞增殖，NaHS50µmol·L促细胞增殖显著，差异有统计学意义(P<0.

6、01)；LY294002抑制HSCT6细胞增殖，并促进细胞凋亡，差异有统计学意义(P<0.01)。（3）低浓度NaHS对细胞凋亡没有影响，LY294002可显著诱导HSCT6细胞凋亡，与NaHS联合促细胞凋亡作用增强，差异有统计学意义(P<0.01)。（4）NaHS使HSCT6细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达增强，LY294002促使HSCT6细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达含量减少，二者联合使细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达量明显减少，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：（1）H2S通过激活PI3K/Akt信号通路促进肝星状细胞的增殖。（2）PI3K/Ak

7、t信号通路被阻断后调节肝星状细胞的增殖与凋亡，进而延缓肝纤维化的发展。（3）H2S在PI3K/Akt信号通路被阻断后参与调节肝星状细胞中Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA的表达，从而起到抗肝纤维化的作用。关键字：H2S；LY294002；肝星状细胞；PI3K/Akt信号通路；肝纤维化论文类型：A（基础研究）IAbstractObjective:DiscusstheinfluenceofHydrogensulfide(H2S)andLY294002onrathepaticstellatecells(HSC)proliferationandapoptosis;resear

8、chtheroleofPI3K/Aktsignalingpathw