rga、hcbt类抗病相关基因在小麦抗叶锈近等基因系中的检测分析

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1、分类号：墨筮墨：121：垒兰密级：公珏单位代码：学号：100862010403RGA、HCBT类抗病相关基因在小麦抗叶锈近等基因系中的检测分析DetectionandanalysisofRGAandHCBTresistancerelatedgenesinwheatleafrustresistancenear-isogeniclines学位申请人：郭楠指导教师：闫红飞副教授刘大群教授学科专业：植物病理学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二O一三年六月一日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研

2、究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑j＆壅些太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名备挣签字眺驯；年石月f日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解湮j邕盔些太堂有关保留、．使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权煎j匕壅些太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印

3、或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)一学位论文作者签名：智挣签字日期：矽『弓年多月7日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：翩躲名矽纱签字日期：加多年／岛7日电话：邮编：摘要由小麦叶锈菌(Pucciniatriticina)引起的小麦叶锈病，严重危害小麦产量、品质和粮食安全。深入研究、发掘和利用小麦抗叶锈基因，对抗病育种和病害防治具有十分重要的指导意义。本研究根据已克隆的STK、NBS．LRR两类抗病基因同源序列(RGA)和羟基肉桂酰／苯甲酰基转移酶(HCBT)类防卫相关基因的保守结构域设计引物，对

4、50个小麦抗叶锈近等基因系(NILs)及感病对照Thatcher进行检测，进一步选取12个NILs进行表达差异分析，主要研究结果如下：1．根据STK、LZ．NBS．LRR、TIR-NBS．LRR、NBS．LRR和HCBT五种植物抗病相关基因的保守结构域设计的7对引物，在51个小麦材料内各检测到2～4类。2．小麦苗期与成株期各组织器官eDNA中，STK类引物CDS2在苗期TcLrl、TcLr9、TcLrl0、TcLr34和Thatcher的根、茎、叶，TcLrl9、TcLr21和TcLr45的茎、叶以及TcLr24、TcLr38的叶中检测到，成

5、株期存在于除TcLrl、TcLr9、TcLrl0、TcLrl9、TcLr24、TcLr26、TcLr45和Thatcher根以外的所有检测器官中；LZ—NBS—LRR类引物CDS3苗期只在TcLrl、TcLr9、TcLrl0、TcLr21和Thatcher的根检测到，而成株TcLrl、TcLr29和Thatcher的所有所测器官，TcLr21、TcLr24的根、茎、叶和旗叶，TcLrl0、TcLrl9的根、茎，TcLr9、TcLr26和TcLr38的根中均扩出条带；NBS．LRR类CDS6苗期除TcLr29中未检测到，而其他11个材料的茎和叶

6、均扩出条带，成株期在TcLrl、TcLrl0、TcLrl9、TcLr26、TcLr45的所有检测器官，TcLr9、TcLr21、TcLr24、TcLr34、TcLr38和Thatcher的根和茎中均检测到；HCBT类引物CDS7苗期存在于在Thatcher的根、茎、叶，TcLr9和TcLr45的茎、叶，TcLrl、TcLrl0、TcLrl9、TcLr21和TcLr38的茎，成株期在TcLrl、TcLr24、TcLr26、TcLr29、TcLr34、TcLr38、TcLr45和Thatcher的所有检测器官，TcLrl0、TcLr21和TcLr

7、29的茎可检测到。3．STK类引物CDS2在TcLrl、TcLrl0、TcLrl9和Thatcher苗期叶中的扩增产物克隆测序，分别为829bp、865bp、83lbp和83lbp，最大开放阅读框分别编码274、286、274和275个氨基酸，BLASTnLL对均与多个普通小麦受体蛋白激酶序列高度同源，并都具有STK类抗病基因的5个催化亚区，均属于STK类抗病基因。4．LZ-NBS—LRR类引物CDS3在TcLrl、TcLrl0和Tchatcher苗期根中扩增产物克隆测序，长度均为898bp，最大开放阅读框均编码174个氨基酸，BLASTn比

8、对与小麦抗条锈基因YrlO的mRNA全长及粗山羊草的Lz—NBS—LRR抗病相关基因相似性均达100％，均具有抗病基因NBS的特征结构域(激酶2a、激酶3a)及HD