trpm3在原发性肝细胞癌中的表达及意义

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1、中图分类号UDC学校代码八年制博士学位论文10533密级公开TRPM3在原发性肝细胞癌中的表达及意义ExpressionofTRPM3anditsSignificanceinPatientswithPrimaryHepatocellularCarcinoma作者姓名：李校城学科专业：临床医学研究方向：外科学学院(系、所)：湘雅二医院指导教师：徐迅迪教授中南大学二。一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大

2、学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：斟日期：塑卫年』月列日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。期：址年三月丑日中文摘要TRPM3在原发性肝细胞癌中的表达及意义原发性肝细胞癌是一种最常

3、见的肝脏恶性肿瘤和主要的癌症死因。其危险因素主要有病毒感染、黄曲霉素B1暴露和饮酒等。肝切除及肝移植给部分患者带来长期生存的可能。但许多患者发现过晚和肝脏疾病的进展，这些治疗对绝大多数患者并不适用。早期发现和精确分期对改善原发性肝细胞癌的临床预后十分重要。随着分子生物学的发展，对肿瘤进行分子水平的分析也许能对肝细胞癌的诊断和治疗带来一定的帮助。RNA干扰是由双链RNA介导的转录后基因沉默过程。siRNA(smallinterferingRNAs，小干扰RNA)是一类约19-21个碱基对的RNA，与目标RNA互补，能与RNA诱导的沉默复合物结合，并通过目标mRNA裂解或抑

4、制翻译而促使mRNA衰减以调节靶基因表达。侵袭性癌细胞中RNA干扰介导的敲除改变了1000多个基因的表达，RNA干扰技术有效地抑制了细胞增殖、侵袭、肿瘤生长和转移能力。TRPM3是钙通透性离子通道TRP家族中M亚家族中的一员，主要显著表达在肾和脑，但在其它组织中也是广泛表达的。TRPM3离子通道在许多组织和细胞中参与了重要的生理功能。TRPM3在肾脏钙离子稳态中发挥重要作用，与胰腺D细胞中胰岛素分泌有关，是一种热敏通道，而且与血管平滑肌的细胞收缩和细胞因子分泌有功能相关性。目前没有资料报道TRPM3通道在人肿瘤组织中的表达，并不清楚TRPM3表达的改变是否与临床病理参数

5、相关。本课题研究TRPM3通道在原发性肝细胞癌中的表达及临床意义，并构建TRPM3siRNA序列，研究其对人肝细胞癌HepG2细胞增殖的影响。实验分为两部分：第一部分：目的：检测TRPM3分子在人类原发性肝细胞癌样本的癌组织和癌旁组织中的表达并分析其相关的临床意义。方法：收集自2005年3月至2009年12月在中南大学湘雅二医院肝胆外科行肝叶切除术的56例原发性肝细胞癌病例的病理标本和临床资料。用免疫组化实验和荧光定量PCR实验、Westemblot实验来检测TRPM3在原发性肝细胞癌组织、核酸及蛋白水平的表达情况，并分析其与临床病理特征(如年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤数

6、目、组织分化程度、包膜形成、被膜侵犯和门静脉侵犯)之间的关系。结果：1、Westernblot实验结果：TRPM3在原发性肝细胞癌组织中显示较强条带，而在非癌组织中条带较弱。2、荧光定量PCR实验结果：原发性肝细胞癌组织中TRPM3mRNA的表达量是非癌组织表达量的1．5倍。3、免疫组织化学实验：56例原发性肝细胞癌的非癌组织中，TRPM3高表达的36{4tJ(64．3％)。在与其相应的癌组织中，TRPM3高表达的32fflJ(57．1％、)。4、临床病理评估结果：TRPM3的表达在不同组织分化程度间有显著性差异(P

7、及非癌组织中均有高表达。TRPM3的表达与原发性肝细胞癌的分化程度和被膜侵犯有显著相关性。因此认为：TRPM3的表达可能在原发性肝细胞癌的发生过程中产生了作用，并可能帮助我们判断其预后。第二部分：目的：研究TRPM3siRNA对人肝癌细胞系HepG2增殖的影响。方法：构建TRPM3siRNA序列，培养人肝癌细胞HepG2，MTT法检测siRNA转染后HepG2细胞增殖变化。结果：所设计的序列对HepG2细胞有抑制作用。结论：所设计的TRPM3siRNA在人肝癌细胞HepG2增殖过程中可能发生了作用。全文共图9幅，表4个，参考文献60篇。关