rap2对微丝细胞骨架结构的调控及机制

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1、硕士学位论文Rap2对微丝细胞骨架结构的调控及机制THEREGULATORYANDMECHANISMOFRAP2ONMICROFILAMENTCYTOSKELETONSTRUCTURE杨美玲哈尔滨工业大学2015年6月国内图书分类号：Q71学校代码：10213国际图书分类号：577.21密级：公开理学硕士学位论文Rap2对微丝细胞骨架结构的调控及机制硕士研究生：杨美玲导师：施树良副教授申请学位：理学硕士学科：生物学所在单位：生命科学与技术学院答辩日期：2015年6月授予学位单位：哈尔滨工业大学ClassifiedIndex:Q71U.D

2、.C:577.21DissertationfortheMasterDegreeinScienceTHEREGULATORYANDMECHANISMOFRAP2ONMICROFILAMENTCYTOSKELETONSTRUCTURECandidate：YangMeilingSupervisor：Prof.ShuliangShiAcademicDegreeAppliedfor：MasterofScienceSpeciality：BiologyAffiliation：SchoolofLifeScienceandTechnologyDateof

3、Defence：June，2015Degree-Conferring-Institution：HarbinInstituteofTechnology摘要摘要Rap2属于Ras家族中的Rap亚族，Rap亚族包括Rap1和Rap2，大量文献显示Ras、Rap1具有调控细胞骨架，细胞粘附等功能，而Rap2与Rap1在氨基酸序列上有60%同源性，与Ras有46%同源性，且Rap2特异效应分子MAP4K4、MINK、TINK、PARG均提示Rap2与微丝细胞骨架可能存在联系，本文主要阐明Rap2与微丝细胞骨架关系及其调控机制，为深入研究Rap2信

4、号通路及其生物学功能奠定基础。本文首先利用免疫荧光方法静态比较在稳定表达和瞬时表达Rap2的微丝细胞骨架的形态改变情况，发现在Rap2过表达的NC65，CRL1932，CCF-RC-2细胞中，有60%以上细胞明显变圆，应力纤维排布明显紊乱，细胞失去原有铺展状态，且肌动蛋白与Rap2有共定位的趋势，其次利用活细胞工作站的方法动态观察Rap2对微丝细胞骨架动态变化，Rap2过表达的细胞中，细胞极性消失，微丝骨架紊乱，Rap2干扰后细胞运动能力减慢，应力纤维减弱，并提前进入凋亡状态。对于机制的探索，利用GST-PullDown实验发现在Rap

5、2过表达的细胞中，Rap2显著下调RhoA蛋白活性，增高Rac活性，降低Cdc42活性；免疫荧光方法在CRL1932、CRL1933瞬时表达Rap2后分别FAKY397、Paxillin，Vinculin染色，发现在Rap2过表达后，约60%细胞极性丧失或者伪足呈均一化分布，且Rap2抑制FAKY397磷酸化水平。综上所述，Rap2对微丝细胞骨架改变明显，通过下调Rho蛋白活性，增高Rac活性，降低Cdc42活性和改变黏着斑分布极性等使细胞变小变圆，应力纤维减弱，应力纤维排布紊乱，微丝骨架紊乱。关键词：Rap2；微丝细胞骨架；Rho家族

6、蛋白；黏着斑蛋白I哈尔滨工业大学理学硕士论文AbstractRap2belongstoRasfamilyofRapsubtribe,RapincludeRap1andRap2,alargenumberofliteratureshowsthattheRasandRap1regulatethecytoskeleton,celladhesion,andotherfunctions,Rap260%homologyinaminoacidsequencewithRap1,46%homologywiththeRas,andRap2specificef

7、fectorsMAP4K4、MINK、TINK、PARGindicateRap2maycontactwithmicrofilamentcytoskelet-on,thisarticlemainlyexploretherelationshipbetweenRap2andmicrofilamentcytoskeletonanditsregulatorymechanism,forfurtherresearchonRap2signaling.Thispaperfirstcomparethemorphologicalchangewhenstabi

8、lityandtransientexpressedRap2bycellstainingmethod,WefindwhenNC65,CRL1932,CCF-RC-2cellsexpressedRap2,the