口腔鳞癌患者与健康人唾液差异表达蛋白的初步研究

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1、《中国图书资料分类法》分类号:R739.85单位代码：10660学号:S100343贵阳医学院2013届硕士学位论文口腔鳞癌患者与健康人唾液差异表达蛋白的初步研究研究生：孙昆俊导师：马洪教授年级：2010级专业：口腔临床医学2013年5月25日基金项目：贵阳市科技局社发攻关项目基金贵阳医学院2013届硕士研究生学位论文目录摘要„„„„„„„„„„„„„„2前言„„„„„„„„„„„„„„3材料与方法„„„„„„„„„„„„5结果„„„„„„„„„„„„„„14讨论„„„„„„„„„„„„„„21参考文献„„„„„„„„„„„„„29英

2、文摘要„„„„„„„„„„„„„34致谢„„„„„„„„„„„„„„36略缩词表„„„„„„„„„„„„„37论文原创性声明„„„„„„„„„„38附：综述„„„„„„„„„„„„39-1-贵阳医学院2013届硕士研究生学位论文口腔鳞癌患者与健康人唾液差异表达蛋白的初步研究专业：口腔临床医学（颌面外科方向）研究生：孙昆俊导师：马洪教授摘要目的：1、通过口腔鳞癌患者唾液及健康人唾液中蛋白质组成的对比分析，初步研究口腔鳞癌患者唾液蛋白与健康人唾液蛋白差异表达情况。2、建立口腔鳞癌唾液蛋白质组双向电泳图谱，为进一步获取口腔鳞癌患者唾液蛋白质

3、组的生物学信息打下初步基础。方法：收集口腔鳞癌患者唾液17例，健康人唾液17例，通过以双向凝胶电泳技术分离唾液中的蛋白质，考染染色获取唾液蛋白质组双向电泳图谱，经MALDI-TOF/MS质谱鉴定以及搜索NCBI数据库进行生物信息学分析，获得口腔鳞癌中差异表达的蛋白质信息。结果：选取口腔鳞癌和正常人唾液中具有明显差异表达的10个蛋白质点，对其进行质谱鉴定和生物信息学分析，共鉴定出4种差异表达的蛋白质，其分别为S100A8、S100A8/S100A9、表皮角蛋白2在口腔鳞癌唾液中均呈高表达，而载脂蛋白A-Ⅰ在口腔鳞癌唾液中呈低表达。结论：

4、1、通过唾液蛋白质组学方法对口腔鳞癌患者唾液和健康人唾液中差异表达蛋白进行检测，建立了口腔鳞癌唾液蛋白质组双向电泳图谱，并鉴定出口腔鳞癌的差异蛋白质，为深入研究口腔鳞癌发生发展的分子机制提供了实验基础，并为获取口腔鳞癌患者唾液蛋白质组的生物学信息建立了初步基础。2、本课题证明了在口腔鳞癌发生发展过程中这些功能不同的差异表达蛋白可能起重要调控作用，但还有待进一步研究与探索其调控机制。关键词：唾液口腔鳞癌蛋白质组学双向电泳肿瘤标志物-2-贵阳医学院2013届硕士研究生学位论文前言口腔鳞癌（oralsquamouscellcarcinoma

5、,OSCC）是严重危害人类健康的口腔颌面部最常见恶性肿瘤之一，在口腔恶性肿瘤中占80%以上。目前虽在很大程度[1-3]上提高了治疗水平及治疗技术，但总生存率仍低于60%，所以提高口腔鳞癌治愈率，降低死亡率的重点是早期发现、早诊断、早治。尽管在研究口腔鳞癌发病[4,5]机理方面，从基因(DNA)和基因转录(mRNA)水平作了众多的研究,然而是通过其表达的蛋白质来实现基因的功能，若能直接从蛋白质水平研究口腔鳞癌，将使OSCC癌变过程中的分子事件得到更加全面、真实地揭示，为口腔鳞癌的诊断提供新的手段。肿瘤蛋白组学研究技术与传统的蛋白检测技术

6、如免疫组织化学法、ELISA及Western等相比，能够在蛋白的功能和表达方面具有更加全面的研究。因此，高通量的蛋白组学研究技术是研究肿瘤发生发展机制的理想平台。至今肿瘤蛋白质组学研究的主要内容：一方面是肿瘤全蛋白表达谱的创立，用于分离鉴定肿瘤；另一方面是肿瘤与正常细胞的表达差异研究，鉴定各种病损的差异蛋白，建立肿瘤发生、发展的蛋白组谱，针对发现可作为生物标记的组织、血液及唾液中的特异蛋白进行评估，运用于临床无创伤早期诊断，判断预后以及寻找新的治疗的靶[6,7]标，促进患者生活质量的改善，提高生存率。肿瘤蛋白标记物能作为肿瘤早期发现、

7、早期诊断的条件之一，即是其被发现和合理应用。多年来，研究人员不断致力于肿瘤的特异性标记物的发掘，其中组织和体液是重点研究方向,而目前关于口腔鳞癌蛋白质组学研究报告多是组织、血清方面的蛋白质组学研究，而其他体液蛋白组学的研究较少。当中唾液作为与口腔鳞癌相关的主要体液之一，其含有口腔组织细胞及其代谢或分泌产物，并且起到润滑、缓冲、抗菌等诸多作用，而以唾液为中介用于早期诊断其优势明显:既取样方便且安全无创，又能反复采集提取，并可用于大规模的普查筛选等。美国国立牙科和颅颌面研究科学院(NationalInstituteofDentalandC

8、raniofacial[8]Research，NIDCR)于2006年提出了一项重点研究计划：创立唾液诊断学(salivarydiagnostics)，即在研究健康人唾液中近乎所有蛋白质组分的基础上，创建以唾液为研究对象