mir-26a抑制肝癌细胞增殖并促进其迁移及侵袭

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1、南方医科大学2010级硕士学位论文miR-26a抑制肝癌细胞增殖并促进其迁移及侵袭miR一26ainhibitscellproliferation，andpromotesmigration1●■■●andinvaSloninneDat0Ce儿UIarcarclnoma课题来源：国家自然科学基金(项目批准号：81172587)学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院答辩委员会主席答辩委员会成员赵文淘姚开泰教授肿瘤学学术型硕士研究生学院陈系古教授姚开泰教授湛凤凰教授方唯意教授2013年05月19日广州硕士学位论文lIl

2、llIllIlllllIIIY2406495miR．26a抑制肝癌细胞增殖并促进其迁移及侵袭硕士研究生：赵文淘硕士生导师：姚开泰教授指导教师：肖东研究员摘要MicroRNAs(miRNAs)是一类大约由22—23个核苷酸组成的具有调控功能的非编码小分子RNA，其主要在转录后水平调控基因的表达川，通过与mRNA的37．UTRs结合而发挥调控作用【2】。越来越多的研究表明miRNAs可以调控人类超过百分之五十的编码基因的表达，这就使得它在包括器官发育Dj、细胞增殖14J、分化【5刮、凋亡等的生理和发育过程中发挥着巨大的作用。mi

3、RNAs参与了包括肿瘤在内的许多疾病的过程，他们通常在肿瘤中是表达下调的17J，抑制某些miRNAs的表达会导致肿瘤的发生。这种类型的miRNAs通常发挥着抑瘤基因的作用【8j，当然，miRNAs也可以发挥瘤基因的作用pJ。例如，小部分的miRNAs在肿瘤中高表达并且发挥着瘤基因的作用(如：miR．17．92，miR-155)，大多数的miRNAs在肿瘤中低表达并且发挥着抑瘤基因的作用【7儿圳(如：Let一7，miR-15／miR-16，miR．1／miR一206，miR一29，miR-124，miR．143／miR-145

4、)。研究表明，下调一个发挥瘤基因作用的miRNA可以导致某些抑瘤基因的重新表达，而重新表达一个具有抑瘤基因作用的miRNAs可以下调很多瘤基因的表达ll⋯。miRNAs调控着下游一大簇基因的表达及信号通路，其最终的作用取决于其所有调控基因的总效应⋯J。可见miRNAs的功能是复杂的，目前miRNAs在肿瘤很多方面的作用仍然摘要是不清楚的。miR-26a位于人类3号染色体上，全长21个核苷酸，在多种组织泛表达，其表达无特异性。大量的研究表明，miR．26a抑制鼻咽癌、乳腺癌、肝癌细胞的增殖[12-14】，但却促进胶质瘤细胞的增

5、殖‘15‘161。有趣的是miR-26a抑制急性髓细胞样白血病的增殖，却促进急性T淋巴细胞白血病的增殖【17-18】。这些有争议的结论表明，miR-26a可能在不同的肿瘤和不同的组织学类型中发挥着不同的作用，其功能的复杂程度是毋庸置疑的。肝癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)恶性程度极高，预后极差，全世界约半数HCC患者集中在中国，我国每年约有11万人死于HCC。早期诊断难、复发转移率高是HCC治疗中面临的重要问题。我们通过收集大量HCC组织标本和癌旁非肿瘤组织标本，通过荧光定量PCR的方法分别检测了

6、HCC组织与癌旁非肿瘤组织和伴有转移的HCC组织与无转移的HCC组织中miR．26a的相对表达情况。结果显示与癌旁非肿瘤组织相比，HCC组织中miR．26a的表达水平明显下调，有趣的是我们发现与无转移的HCC组织相比，伴有转移的HCC组织中miR-26a的表达水平又明显上调。而miR-26a在肿瘤中的作用又是非常复杂和有争议的，有研究表FtfJmiR-26a抑铝tJHCC细胞增殖[191，但其在HCC转移方面的作用未见报道，以上我们发现的miR。26a的表达情况会不会预示着miR。26a促进HCC细胞转移呢?如果是这样，那么

7、miR．26a在HCC中就即能抑制增殖又能促进转移。这将促进我们更深入地去认识miRNAs在肿瘤发生、发展过程中更全面的功能。基于miR-26a的研究现状及其在HCC中的表达谱，本课题的研究目的为：明确miR．26a在HCC转移方面的作用并阐明其机制。我们通过上调和下调miR-26a的表达水平明确其对HCC细胞转移的影响，随后进行下游靶基因的筛选和验证，初步探讨miR一26a在HCC女I上生物学行为中所扮演的角色及其机制，这将为深入理解HCC发病的分子机制和寻找新的分子靶向治疗靶点奠定理论基础，为此本课题进行了如下研究：II

8、硕士学位论文方法：1．HCC细胞株和组织标本中miR-26a的表达谱采用qRT．PCR检测BEL．7402、7721、HepG2、Huh7、Hep3B、Sk-Hep一1和PIe7种HCC细胞株miR-26a的表达谱(以正常肝组织366N作为对照)。收集HCC组织标本和癌旁非肿瘤组织标本，应