一株htlv-1病毒全基因组测序分析

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1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterAnalysisofastrainofvirusHTLV-1wholegenomesequencingBy：HuilingWeiSupervisor：GuoqiangZhao，MinLiDepartmentofImmunology,TheBasicMedicalCollegeofZhengzhouUniversityOctober,2013学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的

2、学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：硌彬日期：∥f弓年‘／月胡日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全

3、部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。⋯一：中辔沈嗍驯纠月瑚日中文摘要一株HTLV-1病毒全基因组测序分析硕士学位申请人韦慧玲推荐导师赵国强李敏郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州市450001摘要背景与目的人嗜T淋巴细胞病毒(HumanT．celllymphotropicvirus，HTLV)是第一个被发现的感染人的逆转录病毒。它

4、存在有两个亚型即HTLV．1和HTLV．2，它们之间在基因上的同源性高达70％。HTLV．2主要报道是爱斯基摩人感染：人T嗜淋巴细胞病毒I型(HTLv-1)是一种能持续感染人类的外源性反转录病毒。在世界范围内，受其感染的包括日本、赤道附近非洲地区、加勒比海地区及南美洲地区约有1．2千万人；我国的东南沿海地区，如广州、福建等地也存在小流行区。这种病毒的传播途径包括母婴垂直传播、性传播、共用针头传播和污染血产品传播。当人一旦被HTLv．1感染后，病毒能够在人体内长期存在，潜伏期可长达20年以上，并可在多年后引起白血病或下肢

5、瘫痪等致死或致残性疾病。目前尚未研发出行之有效的治疗药物和病毒预防疫苗。由于我国东南沿海地区存在一定数量的感染人群，又加之随着经济的发展国内人口流动行的加剧，以及HTLV-1传播的特点和输血筛查项目的缺失。因而HTLV-1有可能在国内传统非流行区造成更多的感染者出现。为了深入探索我国传统非流行区感染HTLV-1病毒基因的分子特征，我们在河南湖北大规模HTLV-1调查的基础上，对获得的一株HTLV-1病毒的全基因进行了测序和分析。方法1．标本的ELISA检测：取100份健康人血清标本和在湖北大规模HTLV-1调查得到的6

6、份人类T淋巴细胞白血病病毒(HTLV)抗体检测阳性的血清标本，I中文摘要使双抗原夹心酶联免疫法检测复检。2．WB鉴定：双抗原夹心酶联免疫法检测阳性的6份标本，再使用新加坡MPBiomedicalsAsiaPacificPte．Ltd公司生产的MPDiagnostics(MPD)HTLVBLOT2．4的WB鉴定试剂检测。3．HTLV-1前病毒DNA分段扩增克隆和测序：提取HTLV-1阳性淋巴细胞得到的含有HTLV-1前病毒DNA的基因组，使用9对HTLV-1分段扩增引物分别进行PCR扩增，得到9个相互重叠的HTLV-1片

7、段；用T4连接酶使9个片段分别与T载体重组连接；采用PCR扩增和NcoI和SalI双酶切鉴定重组子；采用Sanger双脱氧终止法进行正反双向测序鉴定；测得的DNA序列采用Sequencher软件3．1版(Genecodes，inc．，AnnArbor,MI，USA)进行拼接，得到全长HTLV-1前病毒基因组DNA序列。4．分离株HTLV-1基因和蛋白进化树分析：结果1．双抗原夹心酶联免疫法检测结果显示，100份健康人血清标本均阴性；初检阳性的血清标本6份有5份阳性，1份位于临界值。，2．使用新加坡MPBiomedica

8、lsAsiaPacificPte．Ltd公司生产的MPDiagnostics(MPD)HTLVBLOT2．4的WB鉴定试剂进行确认检测，结果得到1例HTLV-1标本。3．HTLV-1前病毒DNA分段扩增结果：HTLV-1分段扩增得到1150bp的第一片段、1149bp的第二片段、1135bp的第三片段、1087bp的第四片段、10