穿龙薯蓣皂苷调控wnt_β-catenin通路改善再生障碍性贫血小鼠造血功能的机制研究

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1、学校代码：10063专业代码：100506二〇一八届硕士研究生毕业暨学位论文穿龙薯蓣皂苷调控Wnt/β-catenin通路改善再生障碍性贫血小鼠造血功能的机制研究MechanismofdiosgeninregulatingWnt/β-cateninpathwayinimprovinghematopoieticfunctioninmicewithaplasticanemia专业：中医内科学学位类型：学术学位研究生：左祥宇指导教师：刘宝山教授天津中医药大学二〇一八年五月天津中医药大学硕士学位论文目录中文摘要…………………………………………………………………...………………1

2、ABSTRACT…………………………………………………………………………………3英文缩略词表……………………………………………….…………………………………6前言…………………………………………………………………………………………8实验一再障小鼠模型建立及骨髓间充质干细胞（BMSCs）成脂化诱导…………...……10（一）再生障碍性贫血小鼠模型的建立与评价……………………………………101实验材料……………………….…………………………………………………102实验步骤…………………………………………………………………………103实验结果……………………………….……………

3、……………………………12（二）骨髓间充质干细胞成脂化诱导模型建立…………………...………………………141实验材料…………………………………………………………………………142细胞步骤…………………………………………………………………………143实验结果…………………………………………………………………………15实验二穿龙薯蓣皂苷对再障小鼠Wnt/β-catenin通路的影响…………………………17（一）Wnt信号通路上游因子变化……………………………………………………171Wnt1和Wnt3a基因的检测…………………………………………………………172Wnt1和Wn

4、t3a蛋白的检测…………………………………………………………203实验结果……………………………………………………………………………23（二）Wnt通路负调控因子的变化…………………………………………………………241Wnt10b、β-Catenin、GSK3β基因的检测………………………………………242Wnt10b、β-Catenin、GSK3β蛋白的检测………………………………………243实验结果……………………………………………………………………………24（三）Wnt通路下游调控因子的变化………………………………………………………261Axin、TCF4基因的检测

5、…………………………………...……………………………262Axin、TCF4蛋白的检测………...………………………………………………………263实验结果……………………………………………………………………………26讨论………………………………………………………….………………………………281天津中医药大学硕士学位论文结论…………………………………………………………………………………………41参考文献……………………………………………………………………………………42综述再生障碍性贫血中医病机研究进展…………………………………………49参考文献………………………………

6、…………………………………………………53致谢…………………………………………………………………………………………54个人简历……………………………………………………………………………552天津中医药大学硕士学位论文中文摘要目的：建立再生障碍性贫血小鼠模型，研究穿龙薯蓣皂苷对再障小鼠的药效学作用以及其分子机制，解析Wnt/β-catenin通路的激活与抑制对再障病理过程中的调控作用，寻找穿龙薯蓣皂苷发挥药效学作用的靶点。方法：1模型建立与评价：采用60Coγ射线照射联合尾静脉输入淋巴细胞的免疫介导法建立再障小鼠模型，通过观察血象、骨髓象评价模型成功与否。2实验分组及给药处

7、理：选取SPF级BALB/c小鼠，雌雄参半，6～8周龄，体重20g±2g，将成模小鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、穿龙薯蓣皂苷组、西药对照环孢素组、中药对照雷公藤多苷组（n=6），进行干预。3相关指标检测：采用血细胞分析仪检测外周血象，瑞氏-姬母萨染色处理骨髓象，油镜下观察骨髓增生情况及细胞分类。4Wnt/β-catenin信号通路基因和蛋白的检测：采用实时定量基因扩增荧光检测系统(QPCR)技术检测Wnt1、Wnt3a、Wnt10b、β-Catenin、GSK3β、Axin与TCF4的基因表达；采用WesternBlot