体外培养脐血单个核细胞与cd34+富集细胞

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1、!"卷#期生物工程学报’()*!"+(*#$%%$年&月!"#$%&%’()*$+,(-.#(/%0"$(,(12,-.$%%$!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!%体外培养脐血单个核细胞与!"#$富集细胞王斌康自珍迟占有谭文松"（华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海$%%$#B）摘要对比,+C和CD#2E富集细胞在FC5EGH/#EGH/1E5HE3I(细胞因子组合下的体外扩增特性，发现：CD#2E富集细胞具有很高的扩增潜力，在本实验条件下其总细胞持续扩增了"周，扩增倍数达#!$B%J0K"

2、12%J&倍；而E细胞的扩增发现，,+C在培养至第2周扩增就已呈现下降趋势，最大仅扩增了&#J#K1J$倍。对比集落和CD#2E细胞含量由第%天至第B天有一个上升的过程，而CD#2E富集细胞在培养过程中，集落,+C的集落密度和CD#2密度和CD#2E细胞含量却始终呈下降趋势。在体外培养过程中，CD#2E富集细胞的C5L/M,和CD#2E细胞最大分别扩增了!"&JBK!2J!和!0!JBK!""J"倍，明显高于,+C的!$J2K#J$和&%J1K##J$倍；而CD#2E富集细胞和,+C的N5L/7则只实现了少量扩增，分别为BJ$K&J$和!%J!K#J2倍。结果显示，从CD#2E富集细胞出发扩

3、增造血干O祖细胞，可以得到更多的CD#2E细胞和C5L/M,集落形成细胞。关键词造血干O祖细胞，脐血，,+C，CD#2E细胞，长期培养中图分类号P"!#文献标识码Q文章编号!%%%/#%1（!$%%$）%#/%#2#/%&脐血作为一种可替代造血干细胞来源，可重建&材料和方法骨髓造血及免疫，用于治疗骨髓衰竭、恶性及非恶性［!R#］血液病、某些遗传病、重型免疫缺陷等疾病。与&’&脐血的采集和制备骨髓和外周血相比，脐血作为移植来源具有很多优脐血由上海国际和平妇婴保健院提供。要求供势，首先，脐血中原始干O祖细胞的比例高于骨髓和者为身体健康，发育良好的非高龄产妇，无遗传病［2］动员的外周血；其次减少了

4、移植中病毒性疾病的史，无血液系统疾病，无寄生虫及地方病，SG’、肝传播，并且降低了移植物抗宿主病（M’SD）的发生炎、梅毒等检测均为阴性。每次实际采集脐带血&%［&］率；另外，脐血来源广泛，采集方便，所以近年来有R!$%8H。采集后脐带血经TNF缓冲液稀释，经关脐血移植的研究越来越广泛。但是由于单份脐血!J%BBUO8H59?())密度梯度离心后收集单个核细胞量少，一般为!%%8H左右，只能满足较小儿童移植（,+C），洗涤备用。%的需要，因此人们希望通过体外培养来增加脐血中&’(!"#$细胞的分离纯化造血干O祖细胞的数量以满足较大儿童和成人移植采用,9=9,QCF免疫磁性吸附柱分离装置，用［

5、1］E的需要。CD#2细胞选择试剂盒（,9)94=.9N9(<4?V公司）按其E说明进行CD#2E细胞的分离与纯化。每!J%W!%"在目前的研究中，单个核细胞和CD#2富集细胞都可通过体外培养扩增造血干O祖细胞，但是哪种细胞悬浮于%J#8H,QCF缓冲液中，加&%!H偶联于方式更为有利仍存在争议。本实验在相同的条件下磁珠的小鼠抗人CD#2抗体，2X孵育#%89=，洗涤一E遍后悬浮于%J&8H的,QCF缓冲液，将细胞加入固体外培养脐血单个核细胞（,+C）和CD#2富集细胞，对比考察了$种起始细胞的总细胞扩增、集落形定于高强度磁场中的,9=9,QCF吸附柱中进行分E离，未与磁珠结合的CD#2E细

6、胞随缓冲液流出，与成和CD#2细胞扩增等特性。Y磁珠结合的CD#2细胞保留在吸附柱中，将吸附柱移出磁场后用,QCF缓冲液冲洗吸附柱即获得纯化收稿日期：$%%!/%0/$&，修回日期：$%%$/%!/!"。基金项目：国家“"1#”计划生物领域项目和上海市现代生物与医药项目基金资助（+(*!%$/!$/%"/%!，+(*%%2#!0%%#）。"通讯作者。34)："1/$!/12$&##02；5-6："1/$!/12$&%02"；7/8-9)：:;<-=>4?@;<*4A@*?=#$$生物工程学报MZ卷%的!"#$细胞。?

7、度N?