大鳞副泥鳅雄核发育诱导

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1、遗传学报，25(5).416-421,1998ActaGeneticaSinica人工诱导大鳞副泥鳅雄核发育二倍体克隆鱼的产生赵振山‘,2吴清江2（1华中农业大学淡水水产增养殖生物学农业部重点实验室武汉4300(2中国科学院水生生物研究所淡水生态和生物技术国家重点实验室武汉44"111072)摘要首次获得人工诱导雄核发育二倍体大鳞副泥鳅克隆鱼。方法是：用紫外线21OmJ/CM2辐射浸泡在人工合成卵巢液中的泥鳅卵，使其染色体遗传失活，再与大鳞副泥鳅精子“受精”。在室温26℃条件下“受精”后15min开始，每隔2min一组，将“受精卵”置于39Z'温水中热休克处理2min，以阻止

2、第一次有丝分裂的发生，结果表明：二倍诱导率距“受精”)I-门5-19min和27~29min出现两个高峰，最高二倍诱导率为61.1%。经染色休和形态特征鉴定表明，鱼苗为大鳞副泥鳅雄核发育二倍体克隆鱼，其染色体数（2n二48）和外部形态均与父木川同。关键词大鳞副泥鳅，泥鳅，热休克，雄核发育，二倍体克隆鱼分类号Q789人工诱导雄核发育，首先是卵子在受精前经Y,X,LJV等辐射来破坏其染色体和DNA,使卵子遗传物质失活，再通过温度休克或静水压等处理来抑制“受精卵”第一次有丝分裂时的细胞分裂，使其染色体加倍。由于雄核发育的遗传物质完全来自父方，没有雌性原核的参与，可以用于纯系的快速建

3、立，同时可冷藏濒危物种的精子，以便获得对物种的恢复，对物种的保护具有特殊的意义，因此雄核发育被人们誉为二十一世纪的先巡伎术之一！‘］。人工诱导动物的雄核发育仍处在研究初期，有很多问题org待解决。｝｛前，人工诱导雄核发育已见于川蝶(Platichthysflesus)、马苏大麻哈鱼（Oncorhynchu.sinasou)、美国W(Ambytomame.)dcanum)、虹蹲(Salmogairclneri)、红点溪鳍(Salvelinuslbntinalis),鲤鱼(G)Iprtiruscarpr'a)和尼罗罗非鱼(Oreoclrrarrttsrtrlo}rcus')等‘“

4、一’．s）0上述屏刃材科均采月何种动物，并存在二倍体只见于胚胎期或产量较低等问题。Grunina等〔161首次采用鲤（钓X银螂（韵诱导出2%-3％的属间核质杂交雄核发育的银螂。在国内的研究中，叶玉珍等[17]采用60C}-Y射线，成功地诱导出鲤、卿雄核发育单倍体胚胎；刘汉勤等(I},I通过细胞核移植的方法获得了泥鳅自然加倍雄核发育纯合二倍体。我们以泥鳅和大鳞别泥鳅为材料，成功地诱导出属间核质杂交雄核发育大鳞副泥鳅二倍体克隆鱼，二倍化诱旱率达61.1%，本文是对该实验的初步总结报告。本文于1997-03-02收到，1997-09-03修回国家自然科学基金资助项目5期赵振山等：人

5、工诱导大鳞副泥鳅雄核发育二倍体克隆鱼的产’巨417I实验材料和方法1.1亲鱼的来源及选择泥鳅(Misgurnusanguillicaudatus）和大鳞副泥鳅（Paramisgurnu5dahryanus）属鳅科鱼类中两个不同的属，染色体数分别为2n=100和2n=48['91。亲鳅来源于武汉市汤逊湖区，体重301--50g，体长15-25cm。根据两种鱼的典型特征区别种类和雌雄。采用绒毛膜促性腺激素（HCG）进行人工催产，催产剂量：雌鱼800---1000lu，雄0_400一5001U.1.2卵子染色体遗传失活室温（260C）下，将成熟泥鳅卵子平铺在盛有人工合成卵巢液［[2

6、01的培养皿中，卵巢液深为3.5mmo参照Bongers等［[141的方法，用210mJ1cm2的紫外辐射剂一策照射卵子，边照射边搅动，然后与大鳞副泥鳅精子“受精”。“受精”后分为10组，其他对照组设置见表1。在直径沪二16cm的培养皿中孵化，孵化水温为26110Co表1热休克人工诱导大鳞副泥鳅雄核发育二倍体克隆鱼产最Table1Artificialinducedtheyieldofandrogeneticdiploidclon<".inParamisgurnusdahryanusbyheatshock组号母本父本灭活“受精”后热休克总卵数“受精”“受桔2n苗数2n占“受精”

7、情况起始时间（min)率％卵t（尾）卵百分数％GroupFemaleMaleInactiva-HeatshocktimeTotalFetiliza-Fetilii}i-DiploidPercentsNo.tionof(min)aftereggstionfionfryofdiploidfemalefertilizationratioeggsnumbersfryinrela-genometiontothere由lizedeggs0MM一一85295.281180399.01MP一一76691.369‘产67