茉莉酸甲酯对人涎腺腺样囊性癌细胞生长抑制作用及其机制的实验研究

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1、AthesisdissertationsubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheInhibitoryEffectofMethylJasmonateonAdenoidCysticCarcinomaofSalivaryGlandsByHaidongZhaoTutor：AssociateProf．胎iHeClinicalScienceofStomatologyTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMay2013原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位

2、论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：龟％承日期：矽，弓年r月哆日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印

3、、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位敝憾赵均彳、嗍汐，．≥年s月矽日摘要茉莉酸甲酯对人涎腺腺样囊性癌ACC．2细胞株作用的实验研究研究生：赵海东导师：何巍副教授摘要研究背景：涎腺腺样囊性癌(SalivaryAdenoidCysticCarcinoma，SACC)是较为常见的涎腺恶性肿瘤之一，好发于小涎腺及大涎腺中较小的腺体，约占涎腺上皮性肿瘤的11％，约占涎腺恶性肿瘤的27％。可发生于任何年龄，以40"～60岁居多，

4、无明显性别差异。SACC生长缓慢，侵袭性强，容易向神经、血管和骨呈浸润和破坏性生长，术后常有复发。SACC区域淋巴结转移少见，可发生肺、骨、脑和肝等远处转移，致患者术后生存率低，预后较差。因此，寻找针对SACC的新疗法和低毒高效的抗癌药物势在必行。’植物激素(planthormone)又称植物天然激素或植物内源性激素，是一类有机物质，由植物自身代谢产生，自产生部位移动到作用部位，在极低浓度下就可显示出明显的生理效应。茉莉酸(JasmonicAcid，JA)及其甲酉匕(MethylJasmonate，Me．Ja)在植物界广泛存在，已被第16届(1999年)国际

5、植物生长会议接受为新一类的植物激素，是调节高等植物发育、应答外界刺激(尤其是创伤)、调节基因表达的一类内源性信号分子。近年来的研究表明，JA可致使人淋巴细胞白血病细胞Molt．4株死亡，抑制人乳腺癌MCF．7细胞株、黑色素瘤SK．28细胞株和前列腺癌LNcaP细胞株增殖，而Me-Ja能够导致以上各种细胞株死亡。Me-Ja还能抑制口腔鳞癌细胞、肝癌细胞、神经母细胞瘤细胞的生长，诱导其发生凋亡。鉴于不同细胞对其敏感性存在差异，本研究选择人涎腺腺样囊性癌ACC．2细胞株进行实验，观察Me．Ja对ACC．2细胞的作用，为其治疗SACC提供实验理论依据。摘要目的：本课

6、题以腺样囊性癌ACC-2细胞为研究对象，通过体外实验研究，从细胞和分子水平上观察Me．Ja对ACC．2细胞株的作用，探讨其可能存在的机制，为Me—Ja抗SACC作用的进一步研究提供理论以及实验依据。方法：1．体外培养ACC．2细胞，运用CCK．8法筛选茉莉酸甲酯的有效作用浓度及增值抑制率测定；倒置显微镜观察各组细胞形态变化；透射电镜下观察各组细胞的超微结构；流式细胞术检测细胞周期分布。2．应用RT-PCR技术及免疫细胞化学SP法分别检测各组ACC．2细胞中Bel。2、BaxmRNA和蛋白的表达强度。3．实验分组：空白对照组、5．Fu组、Me．Ja组、Me-J

7、a+5．Fu组。结果：1．CCK．8法检测各浓度梯度Me。Ja作用不同时间对ACC．2细胞增殖抑制率结果：Me．Ja对ACC．2细胞具有增殖抑制作用，这种作用随Me．Ja作用浓度的增加、作用时间的延长而增大，呈现浓度和时问依赖性。2．19Ie．Ja对ACC．2细胞的半数抑制浓度Ic50结果：Me．Ja对ACC一2细胞半数抑制浓度IC50为9．20I．tmol／L。后续试验Me．Ja浓度采用1／2IC50，即4．61．tmol／L．3．倒置显微镜下观察Me．Ja作用后ACC．2细胞的形态学变化结果：空白对照组：ACC．2细胞贴壁生长，细胞呈梭形、多边形，异型性

8、明显。5．Fu组和Me．Ja组及联合作用组均可见部分