雌激素及雌激素受体α对谷氨酸诱导神经细胞损伤的作用研究

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1、«中国图书资料分类法»分类号：R741单位代码：10660学号：S100158贵阳医学院2013届临床医学硕士专业学位材料(临床论文部分)雌激素及雌激素受体α对谷氨酸诱导神经细胞损伤的作用研究研究生：张广云导师：王建怡教授年级：2010级专业：儿科学2013年5月18日目录摘要.....................................................1缩略词表..................................................3前言..............................................

2、.......5第一部分谷氨酸诱导神经细胞损伤模型的构建及鉴定1、前言..................................................72、材料与方法.............................................83、结果.................................................124、讨论.................................................15第二部分雌激素及雌激素受体α对谷氨酸诱导神经细胞损伤的保护作用1、前言............

3、.....................................162、材料与方法............................................173、结果.................................................264、讨论.................................................33结论....................................................36参考文献..................................

4、...............37致谢....................................................42英文摘要.................................................43论文原创性声明...........................................45综述....................................................46附：临床能力考核有关材料：贵阳医学院2013届硕士研究生论文临床轮转考核表(按时间顺序)学术活动情况表(按时间顺序)临床

5、能力考试及学位答辩情况表贵阳医学院2013届硕士研究生论文雌激素及其受体α对谷氨酸诱导神经细胞损伤的作用研究专业名称：儿科学研究生：张广云导师：王建怡教授摘要目的建立谷氨酸（GlutamateGlu）诱导的神经细胞损伤模型，观察雌激素及雌激素受体a（EstrongenreceptoraERa）对谷氨酸诱导神经细胞损伤的保护作用，分析其可能作用机制，希望为进一步认识神经系统相关疾病的病理生理过程提供理论依据，并为相关领域的治疗提供新的思路。方法原代培养皮层神经细胞，神经元特异性烯醇化酶(Neuronspecificenolase,NSE)免疫组化染色方法鉴定神经元的纯度。建立Glu诱导的

6、神经细胞损伤模型，通过检测细胞乳酸脱氢酶（Lactatedehydrogenase,LDH）漏出率以及细胞凋亡率，鉴定该损伤模型。用前期试验中已构建成功的ERα重组慢病毒(V-ERa-RFP-flag)，感染Glu诱导的神经细胞损伤模型，实时荧光定量PCR和westernblot方法检测ERα转录和蛋白相对表达水平。实验分为3组：①对照组：空慢病毒(V-RFP-flag)感染Glu诱导的神经细胞损伤模型；②雌激素组：雌激素干预Glu诱导的神经细胞损伤模型；③慢病毒组:V-ERa-RFP-flag感染Glu诱导的神经细胞损伤模型。通过流式细胞仪（Flowcytomety，FCM）、酶标仪

7、分别检测各组神经细胞凋亡率、LDH漏出率以及Caspase3活性，观察对比神经细胞损伤程度；实时荧光定量PCR及免疫荧光法检测各组神经细胞中N-甲基-D-天氡氨酸受体1（N-methyl-D-asprtatereceptor1,NMDAR1）及Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体（VesicularGlutamateTransporteroftype1,VGLUT1）变化。结果成功原代培养神经细胞，经NSE免疫组化方法鉴定神经元纯度大于90%。Glu诱导的神