groesl启动子提高集胞藻6803外源egfp基因表达效率的研究

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1、西北植物学报，2010，30(3)：0466—0470ActaBot．Borea1．-Occident．Sin．文章编号：1000—4025(2010)03—0466—05groESL启动子提高集胞藻6803外源egfp基因表达效率的研究郭正红，魏兰珍，王全喜(1上海师范大学生命与环境科学学院，上海200234；2华东师范大学生命科学学院，上海200062)摘要：利用聚球藻7942中热激蛋白基因groESL的启动子(PgroESL)~动外源egfp基因在集胞藻6803(Syn—echocystissp．PCC6803)中的表达

2、，通过蛋白免疫印迹技术研究不同温度条件下该外源基因的表达情况。结果表明，42~C诱导30min后，PgroESL启动子能显著提高转基因藻Pg中外源egfp基因的表达，使外源基因的表达量比正常温度条件下提高3．4倍。研究表明，聚球藻7942中groESL操纵子的启动子区域是一类可以受温度诱导的强启动子，能够显著提高宿主细胞中外源基因的表达效率。关键词：PgroESL启动子；增强型绿色荧光蛋白；集胞藻6803中图分类号：Q786文献标识码：AHighExpressionofegfpInducedbythegroESLGenePro

3、moterinSynechoc3}stissp．PCC6803GUOZheng—hong，WEILan—zhen，WANGQuan—xi(1CollegeofLife＆EnvironmentSciences，ShanghaiNormalUniversity，Shanghai200234。China；2SchoolofLifeScience，EastChinaNormalUniversity，Shanghai200062，China)Abstract：ThePgroESLpromoter，whichoriginatedfromS

4、72Pc0cDcc“sp．PCC7942，wasappliedtoin—creasetheexpressionamountsofforeignegfpgeneinSynechocystissp．PCC6803．WesternblotanalysisshowedthattheexpressionlevelsofeGFPundertheinducementofgroESLpromoterwereabout340higherat42℃heatshockfor30minthanthoseundernormalconditions．Th

5、eseobservationsindicatethatthegroESLpromoterisanefficientpromoter．Itcanbeinducedbyheatshockandincreasestheexpressionofforeigngeneincyanobacteria．Keywords：PgroESLpromoter；eGFP；SPf0c5￡ssp．PCC6803蓝藻是一类能进行光合放氧的原核生物，其适中构建了一系列新的表达载体[2]，并在蓝藻中成功应性强，兼有植物及细菌的一些特性，因此又被称为表达了一系列

6、外源基因。相对于其它受体系统，蓝蓝细菌。蓝藻的光合机制与高等植物叶绿体类似，藻细胞不仅无毒且有些种类还具有很高的营养价有些种类还具有固氮、氢代谢的异型胞，现已成为光值，这使得蓝藻成为一种独特的基因工程受体系合、固氮、叶绿体起源以及植物进化等研究领域的理统[1]。1987年TandeauL4等首次将芽孢杆菌的杀想模式植物]。随着基因工程的发展和蓝藻分子生幼蚊毒素基因转到聚球藻7942(sPf。fDffsp．物学研究的深入，人们通过重组DNA技术在蓝藻PCC7942)中，并成功表达。至今为此，在蓝藻细胞收稿日期：2009—10—1

7、4；修改稿收到日期：2010—01-26基金项目：上海师范大学校基金(DKL837)作者简介：郭正红(1983一)，女(汉族)，硕士研究生，主要从事藻类分子生物学研究。E—mail：gzh83828@126．com*通讯作者：王全喜，博士，博士生导师，教授，主要从事藻类生态与分子生物学研究。E—mail：weilz@shnu．edu．cn3期郭正红，等：groESL启动子提高集胞藻6803外源egfp基因表达效率的研究467中已成功表达了一批具有应用前景的外源基因。达外源增强型绿色荧光蛋白基因egfp的载体系统但尚未有任何利用

8、蓝藻基因工程制备的转基因药物和相关转化体系n。为进一步研究如何提高蓝藻面市，究其原因，蓝藻中外源基因表达效率低下一直中外源基因的表达效率，本研究将对该载体系统进是制约蓝藻基因工程长足发展的瓶颈。行进一步改造，拟在外源egfp基因前部加入聚球转录和翻译水平的调控是影响外源基因表