半滑舌鳎免疫相关基因IgT和pIgR的克隆及表达分析.pdf

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1、学校代码：10264研究生学号：M150107150上海海洋大学硕士学位论文半滑舌鳎免疫相关基因IgT和pIgR题目：的克隆及表达分析Cloning,ExpressionAnalysisofIgTandpIgRImmunorelatedGenesin英文题目：Half-smoothtonguesole(Cynoglossussemilaevis)专业：动物遗传育种与繁殖研究方向：半滑舌鳎免疫抗病姓名：王双艳指导教师：陈松林研究员二O一八年五月二十一日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚

2、严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有

3、关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注李军中国科学院海洋所研究员主席尤锋中国科学院海洋所研究员委员杨官品中国海洋大学教授委员李莉中国科学院海洋所研究员委员王师中国海洋大学教授委员中国水产科学院黄海助理研究李希红秘书水产研究所员答辩地点黄海所1号楼3楼会议室答辩日期2018.05.21半滑舌鳎免疫相关基因IgT

4、和pIgR的克隆及表达分析Cloning,ExpressionAnalysisofIgTandpIgRImmunorelatedGenesinHalf-smoothtonguesole(Cynoglossussemilaevis)学位论文完成时间：指导老师签字：答辩委员会成员签字：上海海洋大学硕士学位论文半滑舌鳎免疫相关基因IgT和pIgR的克隆及表达分析摘要半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)主要生长在我国近海地区，是我国重要的海水经济繁育鱼类。由于其肉质鲜美滑嫩、营养价值高、生长速度快等特点

5、而深受人们喜爱并且被广泛养殖。随着养殖数量的增多，病害的威胁也日趋严重，尤其是鳃、皮肤和肠道由哈维氏弧菌所引起的溃烂最为严重，给养殖业带来的严重的经济损失。同时，鱼类主要的生存环境是在水体中，其中皮肤、鳃、肠等一些由大面积黏膜包被的组织是病原体侵入鱼体时首先接触的部位，因此黏膜不仅具有简单的物理隔离作用，其局部黏膜的免疫防御作用对病原的侵入更加重要[1]。由于鱼类的系统进化地位较低以及其自身具有的特性，鱼类自身的获得性免疫机制尚未完善，使得非特异性免疫在抵抗外来病原菌的过程中起到了比特异性免疫更重要的防御效用[2

6、]。因此，从分子免疫应答方面来探究半滑舌鳎自身的免疫相关基因变得尤为紧迫。IgT是一种与硬骨鱼类的IgM和IgD不同的新型的免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig）基因，属于Ig超家族成员之一。本实验根据半滑舌鳎基因组数据库对半滑舌鳎的新型的免疫球蛋白IgT序列的预测，通过PCR扩增以及RACE方法得到了半滑舌鳎IgT基因cDNA全长2033bp，开放阅读框(ORF)1794bp，编码597个氨基酸，5’UTR为99bp，3’UTR为140bp。保守结构域分析显示半滑舌鳎IgT氨基酸包含一个信号肽，4个重

7、链恒定结构域(heavychaindomain,CH)和一个跨膜结构域。经CH区2蛋白序列的同源比对和系统进化树的构建，结果发现半滑舌鳎IgT基因与牙鲆的IgT基因的进化关系最近。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示：IgT基因在半滑舌鳎鳃中的相对表达水平最高，在粘液、肠、脾脏和肾脏中的相对表达水平依次减少，在肌肉中的相对表达最低；经哈维氏弧菌(Vibrioharveyi)感染一定时间后，IgT基因在半滑舌鳎的6个免疫组织中都出现一定程度的上调趋势，其中皮肤和肝脏在12h出现峰值，肾脏在24h出现峰值，在

8、鳃和脾脏在48h出现峰值，而肠到96h时一直处于上调状态；在挑选出半滑舌鳎的抗病家系和易感家系中不同组织IgT基因的qRT-PCR结果显示在抗病家系鱼的脾脏、肠、鳃和粘液中的IgT基因的相对表达水平均高于易感家系，而肾脏和肝脏中IgT的表达水平在抗I上海海洋大学硕士学位论文病家系和易感家系间则没有明显差别。根据这些实验结果可以推测IgT基因在半滑舌鳎抵制外来病原菌的过程中