wdr62蛋白在胃癌发生中的作用及其表达与胃癌耐药和预后的相关性研究

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1、万方数据中图分类号睦孑芩UDC已!里博士学位论文学校代码密级10533WDR62蛋白在胃癌发生中的作用及其表达与胃癌耐药和预后的相关性研究ImpactofWDR62proteininthedevelopmentofhumangastriccancerandassociationofWDR62。with’；istanceandexDresslonwitharugresistananoprognosi。si’ngastriccancer作者姓名：曾珊学科专业：临床医学研究方向：肿瘤学学院(系、所)：湘雅医院指导教师：钟美佐教授答辩委员会主席中南大学二0一三年十一月万方数据

2、学位论文原创性声明fY㈣2㈣68㈣60舢2舢删28本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：望盟：日期：丝年上月垫学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位

3、论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：血导师签日期：月丛日万方数据WDR62蛋白在胃癌发生中的作用及其表达与胃癌耐药和预后的相关性研究中文摘要目的胃癌是近发病率排名第四的恶性肿瘤，接近2／3的胃癌发生在发展中国家，而其中有42％发生在中国。尽管在胃癌的诊断方法及治疗手段上已取得不少进展，但在癌症相关死亡率排名中，胃癌仍高居世界第二。化疗是目前应用于胃癌的临床治疗方案中非常重要的一个手段，对于术后残留癌细胞的

4、清除、防止复发、改善预后等方面都具有积极作用。但是越来越多的临床证据表明，目前常用于一线治疗的多种药物及多种给药方案的总体疗效评价不甚理想，为进一步探询内在原因及探索新的治疗方案提出要求。WD重复区域62(WDR62)是最近发现的和中心体相关的基因，它有32个外显子，1个CpG岛和poly(A)尾。WDR62位于人类染色体19q13．12区，而且靠近CEBPG，GPI和UBA2基因的功能区，参与细胞循环与增殖等生物学过程。这些基因都己被证实在DNA复制及细胞周期中发挥极其重要的作用。WDR62蛋白有13个WD重复区域，在C末端有6个可以被丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)

5、磷酸化激活的位点，具有调控细胞信号通路、转录、有丝分裂和细胞凋亡的功能。当有丝分裂发生时，WDR62的内源性表达大量聚集在分裂细胞的纺锤体极，而不是在细胞核周万方数据围，提示我们WDR62在肿瘤细胞的增殖过程中发挥着关键作用，但WDR62在人类恶性肿瘤中的作用仍然未知。本研究的目的即在于明确WDR62在人类胃癌发展与预后中的作用。方法采集’372例临床胃癌患者的癌组织及癌旁胃粘膜标本，分别进行苏木素伊红(班)染色剂免疫组织化学染色。请两名有经验的病理诊断学家分别独立阅片确认胃腺癌的诊断。用实时荧光定量PCR及WesternBlotting法检测各组织标本中WDR62的

6、表达水平。采集胃癌病例的临床病理学特征，收集随访资料，建立Cox回归模型分析WDR62表达水平、临床病理学特征与预后之间的关系。细胞培养8株人类胃癌细胞系(AGS，SGC7901，BGC．823，MGC．803，HGC．27，SGC7901NCR，SGC7901／DDP和SGC7901／ADM)，用定量RT-PCR及Westernblotting检测WDR62的表达水平。构建慢病毒质粒载体分别转染BGC．823和多重耐药株SGC7901ⅣCR细胞，研究沉默WDR62对细胞生殖、侵袭转移能力、细胞周期、凋亡发生、细胞活力、化疗敏感性等的影响，并检测WDR62，cycli

7、nB，CDKl，caspase3及Akt、ERK等其他若干信号转导分子的mRNA及蛋白表达水平。分别用慢病毒LV-shRNA—ControlandLV-shRNA．WDR62转染的BGC．823和SGC790lⅣCR细胞行裸鼠皮下成瘤试验，31天后，处死裸鼠，取出肿瘤测量其大小及重量，并行HE染色，IHC染色WDR62及Ki67。万方数据结果用实时荧光定量PCR(qRT．PCR)法检测372例胃癌组织标本及其癌旁胃粘膜组织标本(NT)中WDR62mRNA表达水平发现，胃癌组织中的WDR62mRNA表达水平显著高于癌旁组织(O．00654-O．0016