柠条锦鸡儿功能未知基因cκcaad1的克隆及亚细胞定位

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1、内蒙古农业大学研究生学位论文独创声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：日期：加／驴．么．／0内蒙古农业大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解内蒙古农业大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属内蒙古

2、农业大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为内蒙古农业大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为内蒙古农业大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：趣箍指导教师签名：查!丑蝠日期：迎丝：笸：Z星摘要柠条锦鸡儿是我国西北部干旱荒漠地区生长的豆科锦鸡儿属灌木，是一种重要的造林树种和饲用植物。柠条锦鸡儿具有极强的耐逆境能力，是研究植物抗逆的优良材料。目前对柠条锦鸡儿的研究还主要集中在防风固沙和饲用的栽培上

3、，对其生理生化以及抗逆分子机制方面的研究还较少，只很少几个柠条锦鸡儿抗旱基因被克隆。CAAD结构域最早在蓝细菌的氨酰tRNA合成酶中发现并开始被研究，是～个未知功能的结构域，在细菌和真核细胞中也有发现。这个结构域在多种氨酰一tRNA合成酶中作为独立的结构域存在，是氨酰一tRNA合成酶定位于类囊体膜所必需的。本研究从干旱处理后的柠条锦鸡儿抑制差减杂交文库中克隆得到～个基因。生物信息学分析表明：该基因序列全长140lbp，有5个外显子和4个内含子，预测可编码CAAD结构域，因此命名为强CAADI。同时，构建了CkCAADl基因与荧光蛋白GFP融合的表达载体，利用拟南芥瞬时表达

4、系统，观察到该蛋白定位于叶绿体中。此外，对CkCAAI)I基因在干旱条件下的表达情况进行了’qRT-PCR分析。结果显示，该基因在干旱处理后1小时表达量轻微上升，之后随着时间的推移，表达量逐渐下降。为了进一步研究该基因的功能，构建了由35S启动子驱动的融合有HA标签的过表达载体，并进行了拟南芥的遗传转化，目前正在筛选过表达纯合体株系。关键词：柠条锦鸡儿；干旱；CkCAADI基因；亚细胞定位；CloningandSubcellularLocalizationofanFunctionUnknownGeneCkCAADlfromCaraganakorshinskiiKom．Ab

5、stractCaraganakorshinskiiiswidelydistributedinthenorthwestdesertofChina．It’Susuallyraisedtoprotectenvironment，fixdesertificationandfeedanimals。C．korshinskiihasastrongtolerancetoabioticstress，therefore，it’Sextremelysuitableforstudyingplantstresstolerance．ManyinvestigationsaboutC．korshinski

6、ifocusonitscultivation，littleisaboutitsphysiology，biochemistryandthemolecularmechanismsinstresstolerance．Sofar，onlyseveralgenesresponsivetOdroughtinC．korshinskiiwasclonedandanalyzed．CAADdomainwasinitiallydiscoveredinaminoacyl—tRNAsynthetase(aaRS)，itsfunctionstillremainsunknown。Previousdat

7、ashowedthatCAADdomainalsofoundinbacteriaandeukaryon，it’StheuniquedomaininfourkindsofaaRS，moreover，it’SessentialfortheseaaRStolocalizeinthylakoidmembrane．Agenefromthesuppressionsubtractivehybridization(SSH)libraryofC．korshinskiiunderdroughttreatmentwasclonedandanalyz