b细胞转录激活因子对急性哮喘小鼠气道炎症的调控机制

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1、中图分类号：R562.2+5硕士学位论文B细胞转录激活因子对急性哮喘小鼠气道炎症的调控机制院（系）、所临床医学院研究生姓名原淑莉学科、专业内科学导师姓名范贤明教授资助项目：四川省卫生厅资助项目（NO.120328）二Ο一三年五月1目录1B细胞转录激活因子对急性哮喘小鼠气道炎症的调控机制………………………………………………………………11.1中文摘要………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………41.3前言……………………………………………………………71.4材

2、料与方法……………………………………………………111.5结果……………………………………………………………201.6讨论……………………………………………………………271.7结论……………………………………………………………311.8参考文献………………………………………………………321.9英汉缩略词对照表……………………………………………352致谢……………………………………………………………363成人难治性哮喘的研究进展（综述）………………………372B细胞转录激活因子对急性哮喘小鼠气道炎症的调控机制摘

3、要目的：探讨B细胞转录激活因子（Bcellactivatingtranscriptionfactor,BATF）对卵清蛋白（OVA）致急性哮喘小鼠气道炎症的调控机制及其与维甲酸孤儿核受体γt（RORγt）的关系。方法：（1）将24只健康雌性BALB/c小鼠（SPF级，体重15-18g，周龄6-8周），随机分为3组，0.9%生理盐水对照组（NS组）、哮喘模型组（AS组）、地塞米松治疗组（DEX组），每组8只。AS组、DEX组小鼠分别于第0、7、14天用卵清蛋白抗原液(100μgOVA和1mg氢氧化铝混合的生理盐水混

4、悬液)200μl腹腔内注射致敏，NS组用等体积生理盐水以同种方式代替抗原液。第21天起,NS组以生理盐水，AS组、DEX组以2%的OVA超声雾化吸入进行激发，每天1次，每次40分钟，连续5天。DEX组于每次激发前30分钟，予以地塞米松1.0mg/kg腹腔注射进行干预，NS组、AS组则予以等体积的生理盐水腹腔注射，时间同上。各组小鼠末次激发结束24h后腹腔注射麻醉，行支气管肺泡灌洗及留取肺组织标本。（2）分别对支气管肺泡灌洗液（Bronchoalveolarlavagefluid,BALF）中白细胞（WBC）及嗜酸

5、性粒细胞(EOS)、中性粒细胞（PMN）进行计数；双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测上清液中白细胞介素17（Interleukin17，IL-17）的表达；肺组织病理切片，HE染色观察支气管肺组织炎症浸润程度；实时荧光定量聚合酶链式反应（realtimePolymeraseChainReaction，RT-PCR)分别检测肺组织中IL-17、BATF、RORγt在mRNA水平的表达情况。利用SPSS17.0软件对各组实验数据进行3统计学分析，变量以均数±标准差(xs)表示，组间变量用单因素方差分析，两变

6、量的相关关系用直线相关分析，统计学差异均以p<0.05界定。结果：（1）病理组织切片HE染色结果显示：NS组小鼠支气管管壁平滑肌较薄，管腔光滑、规则，腔内未见分泌物积存，气道黏膜皱襞低平规则，肺泡间隔宽且清晰，支气管血管管周及肺泡间隔内无明显炎症细胞浸润；AS组小鼠支气管管壁平滑肌明显增厚，管腔内大量粘液栓形成及气道黏膜皱襞肥厚增生不规则，纤毛排列紊乱，致支气管管腔极度狭窄，多处气道上皮断裂、脱落不完整，支气管血管管周及肺泡间隔内大量炎症细胞浸润，肺泡间隔增厚明显，分界不清，炎症细胞浸润多以EOS、淋巴细胞及PM

7、N为主；DEX组小鼠支气管管壁增厚及管腔狭窄的程度均较AS组减轻，管腔内分泌物显著减少，肺泡间隔清晰可见，支气管血管管周及肺泡间隔内炎症细胞浸润情况有所改善。（2）AS组BALF中的白细胞总数、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞数较NS组明显增多（P<0.01）；与AS组相比较，DEX组白细胞总数、嗜酸性粒细胞及中性粒细胞数明显减少（P<0.01），但仍比NS组多（P<0.05）。（3）ELISA结果显示：AS组BALF中IL-17蛋白浓度明显高于NS组、DEX组（P<0.05）；与AS组相比，DEX组BALF中IL-17

8、蛋白浓度有所降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。（4）RT-PCR结果显示：AS组肺组织IL-17、BATF、RORγtmRNA的表达水平明显高于NS组、DEX组，差异均具有统计学意义（P<0.05）；与AS组相比，DEX组肺组织IL-17、BATF、RORγtmRNA的表达水平降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。（5）相关关系分析：小鼠肺组织IL-17mRN