资源描述：
《t-dna介导的基因诱捕技术及其在植物功能基因组学研究中的应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、植物学通报ChineseBulletinofBotany2008,25(1):112-120,www.chinbullbotany.com.专题介绍.T-DNA介导的基因诱捕技术及其在植物功能基因组学研究中的应用杨珍珍,李萍,王崇英*兰州大学生命科学学院,细胞生物学研究所,兰州730000摘要T-DNA介导的基因诱捕技术是近年来发展起来的鉴定和分离基因的方法。在拟南芥和水稻基因组测序已经完成的今天,该技术将在两者基因功能的研究中扮演举足轻重的角色。本文就T-DNA介导的基因诱捕系统、基因克隆和突变体库构建的研究进展及其在植物功能基因组学上的应用等内容进行了综述,并讨论了该技术应用中的一
2、些问题。关键词功能分析,基因鉴定,基因诱捕,突变体库,T-DNA杨珍珍,李萍,王崇英(2008).T-DNA介导的基因诱捕技术及其在植物功能基因组学研究中的应用.植物学通报25,112-120.随着拟南芥和水稻基因组测序工作的完成,功能基随着新技术新方法的不断发展,分析鉴定基因功能因组学成为生物科学当前的研究热点。功能基因组学的方法越来越多,但最直接最有效的方法是构建饱和的的主要研究内容包括基因的识别、鉴定和克隆,基因结基因突变群体,通过突变体分析鉴定基因功能。因此突构、表达调控、功能分析以及基因相互作用等。近些变群体的构建是功能基因组学的基础。随着农杆菌介年来,利用转座子和T-DNA
3、作为转化载体的基因诱捕技导的植物转基因技术的不断完善,通过创造大量的T-术为植物基因分离、鉴定和功能分析的研究提供了强DNA独立转化子来建立T-DNA突变体库的方法已成有力的工具。T-DNA介导的基因诱捕技术是以T-DNA为快速构建插入突变体库的主要方法。至今已构建了作为转化载体,对其进行适当修改后整合报告基因,通过225000多个拟南芥T-DNA插入突变体,获得了360报告基因的表达来研究目的基因表达并进而分离、鉴000个T-DNA插入位点序列,这几乎可以代表拟南芥定基因的一门遗传学技术。其基本原理是将含有已知的整个基因组(LiandZhang,2006)。同样,科学家DNA序列的T
4、-DNA载体通过转化插入到受体基因组中,们构建了200000个水稻T-DNA插入系,这些突变体使插入位点基因的功能缺失或获得从而造成突变,并在库已经比较大,可以从中以90%的几率找到一个特定被诱捕序列启动子的控制下表达插入的报告基因,以鉴的基因(AnandLee,2005)。现在利用T-DNA突变定可见或非可见的突变。T-DNA不仅可作为诱变剂产体库分离和鉴定基因功能的报道越来越多,说明其在植生大量突变体,而且转化载体中的报告基因还可作为克物功能基因组学中的应用潜力很大。目前拟南芥和水隆整合位点内源基因的标签,分离和鉴定突变体相关基稻等植物的基因组测序已经完成,人们正想尽办法将这因。到
5、目前为止,通过基因诱捕已经发现了很多新基庞大的新遗传信息与基因功能联系起来。为此本文将因。在拟南芥已经克隆的620多个有表型的突变体基主要介绍T-DNA介导的基因诱捕技术在植物基因分因中,有40%是通过T-DNA介导的基因诱捕技术分离离、突变体库构建以及在功能基因组学研究中的应用的(MeinkeandScholl,2003)。及进展。收稿日期:2006-10-24;接受日期:2007-05-15基金项目:国家自然科学基金(No.30370087)和教育部“春晖计划”(No.Z2004-1-62002)*通讯作者。E-mail:wangcy@lzu.edu.cn杨珍珍等:T-DNA介导的
6、基因诱捕技术及其在植物功能基因组学研究中的应用113服了传统方法的局限性,但35S启动子组成型表达同样1T-DNA基因诱捕载体的发展会造成一些致死性突变。因而,近两年来发展了一种高根据所构建的报告基因的结构,目前已建立了3种T-效且严格依赖于动物雌激素诱导的植物表达系统,即化DNA基因诱捕类型:启动子诱捕、增强子诱捕和基因学诱导型启动子XVE系统,从而解决了致死性突变的问诱捕,关于它们的基本原理及其结构已经有很多报道题。XVE是一个融合转录因子,分别表示细菌转录抑(Tangetal.,2001;江树业等,2003;LiandZhang,制子Lex的DNA结合域(X)、病毒转录激活子VP
7、16的2006)。近些年来,研究者们在传统诱捕系统载体的基转录激活域(V)及人类雌激素受体的调节亚基(E)。XVE础上发展了一些新的载体系统。一个应用较广的增强子表达载体携带一个由人工合成的强组成型启动子G10-诱捕系统是GAL4/VP16-UAS-报告基因系统。在此系90及一个由35S基础启动子和8个拷贝的LexA操纵子统中,带有弱启动子的GAL4基因定位于T-DNA的右边序列融合形成的人工启动子。在G10-90启动子的控界,报告基因与GAL
