家蝇防御素抗菌肽des-hf突变体的抑菌活性研究

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1、农业生物技术学报JournalofAgriculturalBiotechnology2008,16(1):85~89·研究论文·家蝇防御素抗菌肽突变体的抑菌活性*1, 仇妍虹1,2, 李腩3, 郑其升1, 曹瑞兵1, 周斌1, 张秋伟4, 陈溥言1** 李鹏(1.南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，南京210095;2.北京市兽医卫生监督所,北京10044; 3.河北农业大学动物科技学院,保定071000;4.山西农业大学动科院，太谷030801)摘要：采用PCR定点突变技术，将家蝇(防御素抗菌肽成熟肽段的基因()第32位氨基酸残基由甘氨酸(G)突变为带正电荷的精

2、氨酸(R)，构成第一个突变体；采用同样的方法在基因的C端加上6个带有正电荷的赖氨酸(K)，构成第2个突变体。采用毕赤酵母()表达系统对上述2个突变体进行表达。抗菌特性表明,抗菌肽突变体对金黄色葡萄球菌()有较好的抑菌活性。琼脂孔扩散法检测和的抑菌效价比分别提高了2.4和8.0倍。酸稳定性试验显示,抗菌肽突变体在pH值为5～6时活性最高，热稳定性试验显示和100℃加热10min后仍具有抑菌活性。显示了两抗菌肽突变体具有良好的应用前景。关键词：家蝇防御素抗菌肽；突变体；抑菌活性；防御素中图分类号：S182文献标识码:A 文章编号:10061304(2008)01008505Antibacter

3、ialActivityofTwoDefensinMutants LIPeng 1,QIUYanhong 1,2,LINan 3,ZHENGQisheng 1,CAORuibing 1, ZHOUBin 1,ZHANGQiuwei 4,CHENPuyan 1** Thecodeofglycine(G)atthethirtysecondpositionofdefensingenewasreplacedbyarginine(cationicaminoacids)residuetoobtainthefirstmutantnamedwithsitedirectedmutagenesismethod.

4、Sixlysines(K) wereattachedtotheCterminalofgenetoformthesecondmutantnamed usingthesamemethod.Thetwomutantswereexpressedin expressionsystemandshowedperfectantibacterialactivityagainstgrampositivebacteria,suchas.Agardiffusionassayshowedtheantibacterialactivitiesofandwere2.4and8.0higherthanthatof,resp

5、ectively.AcidicstabilityexperimentelucidatedthattheantibacterialactivitiesofthetwomutantswerehighestwhenpHwas5~6.Thermalstabilityexperimentshowedthattheantibacterialactivitiesstillexistedwhenthetwomutantswereheatedat100℃for10min.Allresultsaboverevealedsufficientlythat andhavegoodperspectiveforappl

6、ication. houseflyantibacterialpeptidedefensin;mutation;antibacterialactivity;defensin抗生素的滥用不仅导致了药物残留等公共卫生菌活性肽。它是一类富含精氨酸的阳离子低分子短隐疾，而且由于耐药菌株的出现，使得细菌性疾病的肽，广泛分布于动物、植物和昆虫体内(Bals,2000; 防治再次成为困扰人类的难题。随着人们对无毒、无Ortega2000)。家蝇防御素抗菌肽(housefly 残留和无耐药性新一代抗菌物质的认识,抗菌肽已autibactrialpeptidedefense)是一类碱性多肽,分子中成为研究热点

7、。防御素是近年来发现的一组新型抗形成两性分子的琢螺旋结构,分子中含有半胱氨*基金项目：教育部高校博士点基金(No.20050307023)和江苏省科技攻关项目(No.BE2006364)资助。**通讯作者。Authorforcorrespondence.硕士，教授，主要从事动物分子病毒学与免疫学研究。Email:.收稿日期:20070522接受日期:2007062786农业生物技术学报2