牛黄对胃癌细胞bgc-823增殖抑制、诱导凋亡的实验研究

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1、中图分类号UDC610硕士学位论文学校代码!Q§三呈密级公珏牛黄对胃癌细胞BGC．823增殖抑制、诱导凋亡的实验研究StudythegrowthinhibitionandapoptosisofgastriccancercellsBGC．823treatedwithcalculusbovis作者姓名：学科专业：学院(系、所)：指导教师：黄芳肿瘤学湘雅医院钟美佐论文答辩日期型答辩委员会主席牲中南大学矽，，年J’月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成

2、果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：送鲨一．日期：竺年』月!日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。中南大学硕士学位论文中文摘要摘要研究背景：胃癌是常见的恶性肿瘤之一，在所

3、有恶性肿瘤中排名第四。许多患者被查出胃癌时已处于中晚期，丧失了手术机会。此时，以化疗为主的综合治疗成为首选。近年来多种临床新药的应用，为中、晚期胃癌的临床治疗提供了更多的可能，如5．氟尿嘧啶(5．FU)和顺铂(CDDP)等。然而，化疗药物具有治疗效果的同时亦有副作用，如粒细胞减少，静脉滴注持续时间较长导致的静脉炎、静脉置管并发症等，使胃癌患者依从性差，近年来，中药作为一种辅助治疗性药物越来越受到人们的青眯。牛黄，又名西黄、犀黄。具有清热解毒、抗炎、利胆、抗氧化和清除自由基和增强免疫系统等作用，常用于咽喉肿痛、溃烂、口舌生疮。也可治疗一切痈疽疗毒之症，如用于治疗乳癌、瘰疬、痈毒等症。

4、新近研究发现牛黄具有抑制病毒复制、消炎、利胆、恢复肝功能、提高机体免疫力及抗癌的作用。研究表明：将牛黄作用于人肝母细胞瘤HepG2细胞后，发现其能诱导癌细胞调亡，并可能还有抑制癌细胞生长的作用。这为牛黄在恶性肿瘤的治疗方面的研究和应用开拓了新的思路。迄今，未见牛黄在胃癌中的研究。因此，本研究拟用牛黄干预人胃癌BGC．823细胞株，观察牛黄对BGC．823细胞的抑制增值、诱导凋亡效应，并用牛黄联合5-FU和CDDP诱导BGC．823细胞凋亡的协同作用，以期待为进一步的临床应用提供实验依据。目的：探讨牛黄对BGC一823细胞的增殖抑制、诱导凋亡效应；研究牛黄联合5-FU和CDDP对BG

5、C．823细胞增殖抑制、诱导凋亡的协同作用。方法：用不同浓度的牛黄处理胃癌BGC．823细胞，倒置显微镜下观察细胞形态变化、通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长抑制情况，Annexin．V-FITC／PI双染流式细胞术、Hoechst33343染色检测细胞凋亡；单独用一定浓度的牛黄、5．FU、CDDP作用中南大学硕士学位论文中文摘要BGC．823细胞，再用一定浓度的牛黄、5-FU和CDDP联合作用BGC．823细胞，通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长抑制情况，Annexin．V-FITC／PI双染流式细胞术、Hoechst33343染色、DNA凝胶电泳检测细胞

6、凋亡的情况。结果：1．倒置显微镜下观察发现，BGC．823细胞经不同浓度的牛黄作用24h后细胞数量明显减少、大小不一、细胞间隙增大，表现出明显的细胞生长抑制，随着牛黄浓度的增大和作用时间的延长，细胞形态变圆，体积缩小，折光度减弱，细胞脱落明显，碎片增多。2．MTT法检测不同浓度牛黄作用BGC．823细胞24h、48h、72h后，牛黄各个浓度组的生长抑制率明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0．05)；在同一药物浓度下，随着作用时间的延长，生长抑制率逐渐升高，差异有统计学意义(P<0．05)。MTT法检测牛黄联合5-FU、CDDP对BGC．823细胞的增殖抑制作用，结果发现，BGC

7、．823细胞经5-FU(100¨∥Ⅱ儿)加牛黄(400gg／mL)和CDDP(50gg／mL)联合作用48小时后，细胞的生长抑制率为0．471士0．047；而空白对照组和单独使用牛黄、5．FU、CDDP以及5-FU联合CDDP组作用48小时后，细胞的生长抑制率分别为04-0、0．243+0．09、0．25士0．039、0．258士0．046、0．366士0．045。各用药组与对照组相比较，差异明显，有统计学意义(P<0．05)；而各单独用药组间相比较，组之间无显著性差