花鲈繁殖相关基因的克隆及其在雄性个体中的表达调控分析

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1、义々儀）相ＯＣＥＡＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＣＨＩＮＡ博±学位论文ＤＯＣＴＯ民ＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ花如繁殖相关基因的克隆论文题目：及其在雄性个体中的表达调控分析Ｃｌｏｎｉｎｏｆｒｅｒｏｄｕｃｔｉｖｅｅｎｅｓａｎｄｔｈｅｉｒｇｐｇ＊ｅｘｐｒｅｓｓｉｖｅｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｉｎｍａｌｅｓｏｔｅｄｐ英文题目：ｓｅａｂａｓｓＬａｔｅｏｌａｂｒａｘｍａｃｕｌａｕｓ｛ｔ）作者：巧美丽指导教师：温海深教授学位类别：学术学位专处名称：水产

2、养殖；研究方向：鱼类繁殖生理￣－，．．．—ｂ■．＇Ｖ－－ｒ．禮．瓣耸谨从此论文献给我的导师温海深教授及在我研究生生婚中扶持过我的人们！迟美丽花鱼卢繁殖相关基因的克隆及其在雄性个体中的表达调控分析２学位论文答辩日期：之糾＾指导教师签字：＇答辩委员会成员签字：…畫沪１＾１独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研巧成果，除了文中特别加标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经。据我所知，也不包含未获得（注：如没有其发表或

3、撰写过的研巧成果一，本栏可空。与我他需要特别声明的）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。２＾：日学位论文作者签名：Ｍ签字日期攻年毯＾学位论文版权使用授枚书本学位论文作者完全了解学校有关保留，有权保留并向国、使用学位论文的规定家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可＾心采用影印、缩印或扫描等复制手段保存■、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授

4、权书）学位论文作者签名导师签字：签字曰期：年月曰签字曰期：年月曰么＾皆（如Ｉ／Ｉ［学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通讯地址：邮编花鱼卢繁殖相关基因的克隆及其在雄性个体中的表达调控分析摘要１＾（山ｅｏ／ｆｌＡｍｖ化？本文，：东近海网箱养殖的雄性花妒Ｗ）为研巧对象米用组织学、内分泌学和分子生物学等方法，研究花护精巢发育特定时期给予激素和盐度处理后其繁殖生理功能的变化规律及分子机制等。研究结果和结论如下：１．花妒繁殖相关基因的克隆’’采用ＲＡＣＥ技术，利用５特异引物获得基因全长ｃＤＮＡ序列鱼和

5、３。克隆得到花卢７繁殖相关的全长基因共１２个，分别为（ＧＴＴ／ａ亚基、巧巧亚基、Ｚ／游亚基、况－－－ＨＳＤ－１ＡＭＨ、ＦＴＺＦｌａ、ＦＴＺＦ化、ＣＹＰ］７］、３０、ｍｓａ、ｃＧｎＲＨＮ祝？ＲＬ，义及Ａ仁全）长基因６个７－／／欠户化卽、Ｇ欠ＯＹ９Ｗ（Ｃ＞Ｔ７＾、化、７？、／＾、Ｓ）。通过口喊３１进行多序列比对并利用ＭＥＧＡ５．０软件进行系统进化分析，结果显示所获得的基因在进化上具有高的保守性且都与妒形目相应物种的亲缘关系最近。２．花妒繁殖相关基因的周期和空间表达７战－７７版。和＾巧对花妒繁殖相关基因（Ｇ亚基、化４

6、／？、巧７八、ＣＴＷ、ｊ片■在繁殖周期内的表达情况进行分析，发现所检测基因的表达量在繁殖周期内都发生了显著变化，暗示了它们参与了花妒精巢发育和繁殖过程。对于这些基因的空间表法模式研巧发现，它们都在类固醇生成相关组织如精巢、脑、垂体、肝脏、头肾等中表达量高，但在其他组织中也可１＾检测到基因表达信息。采用原位杂交技术检测精巢内－（：｝＾７７／和３片／／化）基因的定位，发现这两个基因都在精巢间质区域检测到阳性信号。同时结合组织学和激素水平的研究，从而对花妒繁殖相关基因的功能进行更深入的探索。３．雄性花妒在激素处理后的组织学、

7、睾丽水平及繁殖相关基因表达量的变化给予雄性花自片注射ｈＣＧ／ＧｎＲＨａ后，发现精巢生殖细胞发育程度提高，血清中睾丽－，？含量升高。外源激素对脑、垂体和精巢内化亚基基因精巢中的化／ＴＺ凡、ＣＴＦ／７八ｊ片／投Ｚ）Ｗ及脑中的＾欠基因的表达具有促进作用，而对于精巢内的和＾７？ＲＮＡ表达有抑制作用基因的ｍ。依据这些结果推测外源激素可Ｗ促进雄性花ｉ鱼卢精巢细胞的发育，而甘所检测的基因都受判促性腺激素和促性腺激素棒放激素的调控。４．雄性花妒在盐度处理后渗透压水平、精巢组织学、激素水平及繁殖相关基因表达量的变化－血清

8、经过半咸水和淡水处理，ｌ８ｄ后发现花妒血清渗透压水平湿著降低，这与－－－ＬＨ中睾砸水平（ｌ６ｄＷ及精巢组织学变化情况致。淡