高尿酸血症患者血浆microrna表达谱分析及其靶基因预测研究

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1、分类号：R587.1密级：不保密UDC：610学校代码：11065博士专业学位论文高尿酸血症患者血浆microRNA表达谱分析及其靶基因预测研究董利平指导教师王颜刚教授学位类别临床医学博士专业领域内科学（内分泌与代谢）答辩日期2015年11月20日答辩委员会主席赵家军教授高尿酸血症患者血浆microRNA表达谱分析及其靶基因预测研究中文摘要目的：通过microRNA基因芯片技术研究无症状高尿酸血症患者与正常对照者血浆中microRNA的表达差异，并对差异表达的microRNA进行靶基因预测，探讨mi

2、croRNA在高尿酸血症中的作用机制。方法：1.选取4例无症状高尿酸血症患者，4例正常对照者，取其外周血浆用Trizol法提取TMRNA，使用丹麦Exiqon公司的microRNA芯片检测其血浆中microRNA表达谱，并筛选出显著差异表达的microRNA。2.选取1个显著上调的microRNA及2个显著下调的microRNA在50例无症状高尿酸血症患者及50例正常对照者中，使用RT-PCR方法进行验证。并对50例高尿酸血症组及50例对照组进行相关临床资料分析。3.通过搜索并汇总miranda数据

3、库、mirbase数据库及targetcsan数据库，对筛选出的差异表达的microRNA进行靶基因预测，得到特异表达于外周血中的靶基因；再通过GO及Pathway分析，对预测出的靶基因进行相关分子功能分析。结果：1.microRNA芯片表达结果显示，共有263个microRNA在高尿酸血症组与对照组间表达有变化，其中差异表达显著的共有11个，上调的有5个，下调的有6个。2.运用RT-PCR技术，与对照组比较，高尿酸血症组中miR-519d-3p表达上调，差异有统计学意义（P<0.01）；miR-3

4、74a-5p、miR-30c-5p表达下调，差异有统计学意义（P<0.01），验证结果与microRNA芯片结果一致。3.通过对显著差异表达的microRNA的靶基因预测及功能分析，发现这些异常表达的microRNA主要通过其相关靶基因影响TGF-β信号通路、PI3K-Akt信号通路、细胞内吞作用以及Notch信号通路等来发挥其作用。结论：microRNA芯片技术是一种有效的高通量分析高尿酸血症microRNA表达谱的方法，相对于正常对照组，多种microRNA在高尿酸血症患者外周血浆中出现差异表达

5、，有可能成为高尿酸血症的新的分子生物学标志物并可能参与了高尿酸血症的发病机制，但具体的分子机制还有待于进一步研究。关键词：microRNA；高尿酸；芯片技术；靶基因AbstractObjectiveTostudythedifferentexpressionofmicroRNAbetweentheplasmaofasymptomatichyperuricemiaandthehealthycontrolusinggenechiptechnology.Makethetargetgenepredicatio

6、ntothedifferentlyexpressedmicroRNAandexploretheactionmechanismofmicroRNAinpatientswithhyperuricemia.Methods1.Fourasymptomatichyperuricemiaandfourhealthycontrolwererecruited,whoseRNAinperipheralplasmawereextractedbymethodofTrizol.ThemicroRNAexpressionpr

7、ofilewastestedandtheexpressedmicroRNAwasscreenedoutbymicroRNAmiroarray(ExiqonTMcompany,Danmark).2.RealtimeRT-PCRwasusedtoverifytheresultsbetween50asymptomatichyperuricemiaand50healthycontrol.Andtheclinicaldataof50casesofhyperuricemiagroupand50casesofco

8、ntrolgroupwereanalyzed.3.ThetargetgenesofthesemicroRNAswerepredictedthroughsearchingandsummarizingthemirandadatabase,miRBasedatabaseandtargetcsandatabase,andthetargetgeneswereanalyzedbyGOandPathway.Results1.MicroRNAmicroarrayexpressions