一起小反刍兽疫的诊断及病原分离鉴定

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1、中文摘要一起小反刍兽疫的诊断及病原分离鉴定小反刍兽疫（Pestedespetitsruminants，PPR）是由小反刍兽疫病毒（Pestedespetitsruminantsvirus，PPRV）引起绵羊、山羊等小反刍动物的一种急性、烈性传染病，是严重威胁和危害养羊业的一种重要的病毒性疾病，该病目前已被我国农业部列为一类动物疫病。该病传染性强，临床上感染动物主要以出现高热、口炎、肺炎、肠炎为特征，具有较高的发病率和死亡率。PPR以往主要在撒哈拉以南的非洲地区、印度和中东国家流行，呈地方流行性，然而近年来该病呈现蔓延的趋势

2、，在周边多个国家均有该病的发生和流行。自2007年我国西藏阿里地区首次发生小反刍兽疫疫情以来，我国新疆、甘肃、内蒙古等多个省份均有该疫情的发生。2014年4月，辽宁省锦州市北镇某养羊户饲养的57只山羊中，先后有18只山羊出现体温升高（升高至41℃左右）、咳嗽、流鼻涕，且眼、鼻周围可见脓性分泌物以及腹泻等临床症状，一些严重病例很快发生死亡。根据该病的流行特点及临床症状，初步诊断为羊小反刍兽疫。为了进一步证实，本研究利用大体病理剖检、病理组织学观察、细菌学检查、电镜负染观察、RT-PCR等方法从病理学和病原学角度对该病的发生原

3、因进行系统深入的研究。具体研究内容如下：1PPR的病理学诊断对送检病羊进行大体病理剖检，肺脏可见有充血、水肿，肺尖叶呈肉样变；胃壁黏膜发生脱落。随后，采集病羊心、肝、脾、肺、肾、肠等多个组织脏器，制作石蜡切片并进行H.E.染色，病理组织学观察可见，肺脏肺泡隔增宽，呈现典型的间质性肺炎变化；肺泡壁毛细血管充血、淤血，肺泡壁上皮细胞增生；支气管黏膜上皮细胞增生，部分细胞坏死、甚至脱落到管腔中；肝脏发生轻度脂肪变性；肾小管周围毛细血管充血淤血较为严重。2PPR的病原学诊断将肺脏、脾脏等病料进行研磨后提取RNA，利用PPRV特异性

4、引物进行IRT-PCR扩增，扩增获得与预期目的基因片段大小一致的条带。将经感作处理后的病料研磨上清液接种单层Vero细胞进行病原分离，在接种病料72h后出现明显的CPE。收集细胞病变液，反复冻融3次后进行电镜负染观察，可见椭圆形，有囊膜，直径约为300nm的病毒粒子，与PPRV形态特征一致；此外，细菌学检测排除了细菌混合感染的可能性。综合分析以上结果，从病原学角度证实该疫情发生的原因为PPRV感染所致。之后，在分离获得PPRV毒株的基础上，对该分离株的M和F基因进行扩增、克隆及测序，并通过绘制遗传进化树对其M和F基因的分子

5、生物学特性进行初步研究，遗传进化分析结果显示，该毒株与在我国发生流行的毒株亲缘性较高，属于Ⅳ系。该研究不仅为针对PPRV疫苗的研制提供重要的物质基础，而且将为制定针对PPR切实有效的防控措施提供一定的理论依据。关键词：小反刍兽疫病毒（PPRV）；病理学；病原学；诊断；分离鉴定IIAbstractDiagnosisofPestedespetitsruminantsandIdentificationofPestedespetitsruminantsVirusPestedespetitsruminants(PPR)isanacu

6、teandhighlyinfectiousdiseasesofsmallruminantsincludingsheepandgoats,whichiscausedbyPestedespetitsruminantsvirus(PPRV).Thediseaseisoneofthemostimportantviraldiseases,whichcanthreatsheepindustryseriously.Atpresent,PPRhasbeenlistedasAdiseaseinChina.Theclinicalsymptom

7、softheinfectiousdiseaseincludesfever,stomatitis,diarrhea,pneumoniaandenteritis.Themorbidityandmortalityarehigh.Thesub-SaharanAfrica,IndiaandtheMiddleEastcountriesarethemajorepidemicareasofPPRinthepast.However,PPRspreadstosurroundingcountriesgraduallyinrecentyears.

8、SincethefirstoccurrenceinAliareaofTibetin2007,thediseaseisprevalentinmanyprovincessuchasXinjiang,GansuandInnerMongolia.TheoutbreakofthePPRamonggoatscccu