乙肝耐药患者血清microrna差异表达的研究

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1、中图分类号：R44;R51;RS7SICHUANMEDICALUNIVERSITY硕士学位论文乙肝耐药患者血清microRNA差异表达的研究院（系)、所临床医学院研究生姓名王____________&学科、专业临床检验诊断学导师姓名昔远帅二O—五年四月四川医科大学毕业硕士研究生学位论文独创性声明及发表承诺书本人声明所里交的学位论文（已整理成发表形式）是我个人在泸州医学院导师指导v.E导师及泸州医学院提供一切科研条件的情况卜进行的研究I:作及取得的研究成果。论文中除了特I工以标注和致谢的地方外，不包含其他人成其它机构已经发表成撰写

2、过的研究成果。其他同志对本？1究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。在即将毕业离校之际，本重承诺：该论文将以泸州医学院的名义发表（论文作者为研究生及导师，作者所在单位为泸州M学院)，井在发表后立即将发表论文原件（期刊）寄与导师1册。学位论文作者签名：曰期丨5■年5■月站曰四川医科大学硕士学位论文版权使用授权书本人完全了解泸州医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：泸州医学院有权保留并向有关部门或机构送交本人学位论文的复印件和电子版，允许论文被杏阅和借阅，允许有关部门或机构以电子出版物形式出版发行，并对外进行

3、全文内容服务。本人授权泸州医学院可以将本人学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，进行数字化处理汇编、通过网络或其它途径进行交流传播，可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印、扫描或其他复制手段保存和汇编学位论文，即泸州医学院具冇本人学位论文的数字化制品复制权、信息网络传播权和汇编权。同时授权将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《万方数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。保密□，在..年解密后适用本授权15。本人提交的学位论文属不保密口(请在以上方框内打“V，学位论文作者签名：导师签名曰期：>

4、〇丨义年夕月沁曰导师签章：丨日期:>孓年f月^曰联系电话：目录乙肝耐药患者血清microRNA差异表达的研究……………1中文摘要………………………………………………………3英文摘要………………………………………………………5前言……………………………………………………………8材料与方法……………………………………………………14结果……………………………………………………………23讨论……………………………………………………………34结论……………………………………………………………42参考文献……………………………………………

5、…………43英汉缩略词对照表……………………………………………47致谢……………………………………………………………48丙型肝炎相关微小RNA的研究进展（综述）…………………………………………………………………50-2-乙肝耐药患者血清microRNA差异表达的研究摘要目的：探讨microRNA(miRNA)在HBV感染者与健康者，耐药突变者与无突变敏感者血清中的差异表达，判断miRNA用于乙肝耐药突变的诊断价值。方法：首先，我们根据权威文献报道筛选出与乙肝感染相关性最高的两种miRNA——miR-122-5p和miR-125b

6、-5p，收集乙肝感染且2HBV-DNA定量＞5.00×10IU/ml（本研究所采用的试剂盒HBV-DNA最低2检出限为5.00×10IU/ml）的入院患者49名的血清样本作为实验组，实验组样本均来自于四川省泸州医学院附属医院。于四川省泸州医学院附属医院体检中心筛选健康体检者21名的血清样本作为对照组，对照组纳入标准2为HBV-DNA定量＜5.00×10IU/ml且乙肝两对半定量检测全在正常参考范围内。所有实验对象无其它类型肝炎病毒的感染，排除酒精性肝病、自身免疫性肝病、代谢性肝病、药物性肝病、隐源性肝病、血吸虫性肝病、遗传性肝病

7、等；无肾脏、血液肿瘤等可能会影响血清水平的疾病,并且无血液制品输注史；入院后经CT或B超检查排除肝癌的可能；然后，我们提取实验组血清HBV-DNA和所有样本血清总RNA，利用琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性，检测RNA的OD值以判断其纯度，检测结果表明所提取的RNA质量良好，无污染，无降解，符合后续实验要求。接着我们利用反向点杂交法检测实验组的乙肝耐药突变，检测得到实验组耐药突变结果分为rt204I、rt204V、rtL180M、rt204V+rtL180M以及未突变的“野生型”五类。最后，我们以cel-miR-39-3p为外参

8、，检测宿主miR-122-5p和miR-125b-5p的相对表达水平（我们委托广州锐博生物技术有限公司对所-3-有引物进行合成、纯化和鉴定），检测结果通过SPSS17.0软件进行统计分析，探讨：1.患者感染HBV是否影响miR-122-5p和miR-125b-5