人支气管上皮细胞的获取与培养

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1、硕士学位论文人支气管上皮细胞的获取与培养学科专业儿科学√科学学位□专业学位学位类型□研究生姓名朱秀娟导师姓名、职称贺湘玲教授论文编号湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一五年五月湖南师范大学学位论文原创性声明本人郑重声明，：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下独立进行研究工作所取得的成果，。除文中巴经注明引用的内容外本论文不含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作馬成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均邑在文中ｋ义明确方式标明。。本人完全意识到本声明的法律结果由本

2、人承捏兴３年学位论文作者签省：Ｊｒ月＞ｒ曰湖南师范大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者堯全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属湖南师范大学。同意学校保留并向固家有关部口或机构送交论文的复印件和电。子版，允许论文被查阅和借阅本人投权湖南师范大学可将本学Ｌ义、位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可采用影印缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于１、保密□。，在年解密廢适用本授权书２、

3、不保密＂＂（请在Ｌ乂上相应方框巧打Ｖ）作者签省：解输曰期：＞化年玉月如吕？曰期■曰导师签書：年丈月＞０分类号密级学校代码10542学号201202201508人支气管上皮细胞的获取与培养TheacquirisionandcµLtureofhumanbronchialepithelialcells研究生姓名朱秀娟指导教师姓名、职称贺湘玲教授学科专业儿科学研究方向感染病原学湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一五年五月课题来源：呼吸道上皮细胞立体培养平台的构建及应用；国家科技重大专项

4、项目；项目编号2014ZX10004002-007-004。摘要目的：建立可靠的人支气管上皮细胞原代培养方法及鉴定技术。方法：手术切除的新鲜肺组织，去除支气管外的其他组织，保留主支气管和小的支气管，使用PBS液充分冲洗后，去除多次的连接组织和淋巴结，只保留气管软组织，并剪成1×1cm大小的碎片，加入含蛋白酶XIV的消化液中，4℃过夜消化，收集细胞悬液，接种在包被好TypeI/III胶原的培养瓶中，无血清培养基进行原代培养。通过倒置显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行鉴定。结果：1.蛋白酶XIV消化

5、分离支气管上皮细胞可获得较多单个支气管上皮细胞，HE染色可见纤毛细胞、基细胞。2.分离的支气管上皮细胞在无血清培养基中生长良好，1天后细胞逐渐贴壁，细胞小，分布均匀，多成圆形；3-4天后细胞开始逐渐变大、呈多边形；7-10天生长旺盛，可见成片的扁平状、多边形，呈铺路鹅卵石样分布生长。10天后生长缓慢、停止生长，细胞逐渐老化，出现空泡。3.兔抗人的角蛋白8单克隆抗体鉴定原代培养的细胞，胞浆呈棕黄色着色。结论：1.蛋白酶XIV低温过夜消化可获得的较多单个支气管上皮细胞。2.无血清培养基可提供满意的支气

6、管上皮细胞生长条件，提高细胞纯度。3.角蛋白8单克隆抗体免疫组化染色可简单有效的鉴定支气管上皮细胞。关键词：支气管上皮细胞；细胞培养；鉴定；人IABSTRACTObjective:ToestablishareliablehumanbronchialepithelialcellsofprimarycµLturemethodandIdentification.Method:Freshlungtissueaftersurgerytoremovetheotherorganizationsoutsideth

7、ebronchial,retainthemainbronchusandsmallbronchus,usePBSliquidfµLlyafterwashing,removingmµLtipleconnectivetissueandlymphnodes,onlykeeptracheatissue,1x1cmsizeandcutintopieces,addinthedigestivejuicecontainingproteaseXIV,the4℃fordigestion,collectingcellsu

8、spension,vaccinationinthecµLtivationofthepackageisgoodTypeI/IIIcollageninabottle,serumfreemediumforgenerationinprimarycµLture.Byinvertedmicroscopetoobservethecellgrowthandthecellsareidentified.ResµLts:1.ProteaseXIVdigesttheseparationofbronchia