绿色裸小鼠中绿色荧光蛋白荧光示踪作用研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士专业学位论文论文题目绿色裸小鼠中绿色荧光蛋白荧光示踪作用研究研究生姓名芮琴指导教师姓名王爱东黄强专业名称临床检验诊断学研究方向分子生物学检验论文提交日期2015年5月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果9也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以

2、明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉

3、密论文口本学位论文属在_____年_月解密后适用本规定。非涉密论文炉论文作者签名;导师签名S绿色裸小鼠中绿色荧光蛋白荧光示踪作用研究中文摘要绿色裸小鼠中绿色荧光蛋白荧光示踪作用研究中文摘要第一部分“绿色裸小鼠”脑组织中绿色荧光蛋白表达分析【目的】分析绿色荧光裸小鼠脑组织中绿色荧光蛋白(EGFP)的表达情况，为绿色裸小鼠的脑内移植应用提供依据。【方法】采用半定量RT-PCR分析绿色裸小鼠不同脏器组织/细胞和脑不同部位组织中EGFPmRNA表达水平；通过荧光显微镜观察全身主要器官组织和全脑不同层面组织

4、中绿色荧光强度；用荧光定量PCR和荧光分光光度计定量分析、免疫组化定性观察鼠脑不同部位组织中EGFP的表达；在绿色裸小鼠颅内接种表达红色荧光蛋白（RFP）的人胶质瘤干祖细胞SU3-RFP，动物活体成像及荧光显微镜观察小鼠活体脑和脑组织中肿瘤形成情况。【结果】RT-PCR结果显示，绿色裸小鼠各脏器组织和脑组织不同部位都不同程度表达EGFP；荧光显微镜下观察到脑组织不同层面都能显示绿色荧光，且呈现部位差异；qPCR和荧光分光光度计定量分析表明，与大脑皮质相比，小脑皮层、海马和嗅球等组织EGFP表达较高

5、，差异具有显著性（p<0.05）；免疫组化结果显示，小脑皮层、海马等部位存在强阳性表达EGFP的细胞；肿瘤细胞接种至绿色裸小鼠颅内后，小动物活体成像仪和荧光显微镜下可见绿色脑组织背景下红色荧光的肿瘤形成，表明成功建立了脑内红绿双色荧光示踪移植瘤模型。【结论】绿色荧光裸小鼠脑组织中不同程度表达EGFP，而非阴性表达，其中小脑皮层、海马和嗅球等部位表达较高。同其它高表达EGFP的脏器一样，脑也适合做人癌移植荧光示踪实验研究。【关键词】绿色裸小鼠；绿色荧光蛋白；基因表达I中文摘要绿色裸小鼠中绿色荧光蛋白

6、荧光示踪作用研究第二部分双色荧光示踪移植瘤模型中骨髓来源宿主细胞恶性转化初步研究【目的】利用红绿双色荧光示踪移植瘤模型，探讨肿瘤微环境中来源于宿主骨髓的间质细胞的恶性转化问题。【方法】在绿色荧光示踪骨髓重建模型基础上，颅内接种表达RFP胶质瘤干祖细胞SU-RFP，建立红绿双色荧光示踪移植瘤模型。分离移植瘤组织进行体外培养，对可连续传代的发绿色荧光细胞进行单克隆培养（命名为ihBTCBM），并对细胞生物学特征进行分析：CCK-8法绘制细胞增殖曲线，常规方法进行染色体核型分析；将细胞接种至裸小鼠皮下观

7、察细胞致瘤性；采用免疫荧光方法检测细胞中骨髓间充质干细胞标准物Sca-1、CD29、CD44表达情况。【结果】ihBTCBM细胞体外培养呈现出恶性细胞表型，细胞增殖旺盛，染色体为异倍体，皮下接种裸小鼠致瘤率为100%（6/6）；免疫荧光检测结果显示细胞表达骨髓间充质干细胞标准物Sca-1、CD29和CD44。【结论】在EGFP荧光示踪下，从双色荧光示踪移植瘤组织中分离出宿主骨髓来源、可连续传代的细胞，该细胞可能是骨髓间充质干细胞的恶性转化的细胞。【关键词】间质细胞；恶性转化；荧光示踪作者：芮琴指导

8、老师：王爱东主任技师IIStudyonfluorescenttracingrolesofGFPingreennudemiceAbstractsStudyonFluorescentTracingRolesofGFPinGreenNudeMiceAbstractsPartITheexpressionofEGFPinthebraintissuesof"greennudemice"【Objective】Toanalyzetheexpressionlevelsofenhancedgreenf