莲藕sss基因的克隆与表达特性分析

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2、．？．－＇火二换．兰汽－—’＊？■－，！＊．＇．２２５００９、．指导教师姓名：李良俊教授，扬州大学，江苏扬州，．；若‘’、－－？．、产子Ｎ、；￣位级别Ａｔ申请学：硕去学科专业名称：—蔬￣莱学拾自豕＇＂Ｘ：电‘‘‘论文提交日期：２０１５年６月论文答辩日期：２０１５年６月学位授予单位：学位授予日期：卫曲，答辩委员会主席：ｍ＾－‘、‘寒＾坏一？＇＾－，＇：＇－。為层￣＾巧參巧ｖＴａ＾么类争．兹興到參嘉束若、糸鬼ｉ：：．Ｌ：：姻巧么；．：；敲方＼．一，：若Ｔ

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4、ｏｆｔｈｅＲｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓｆｏｒｔｈｅＭａｓｔｅｒＤｅｇｒｅｅｏｆＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓｇＪｕｎｅ２０１５张莉莲藉ｓｓｓ基因的克隆与表达特性分析１莲藉ＳＳＳ基因的克隆与表达特性分析摘要莲藉卿？ａｅｒｔｎａＧ）是睡莲科莲属多年生水生草本植物，在中国有着悠久一的栽培历史，是我国特色水生蔬菜之。淀粉由直链淀粉和支链淀粉组成，是莲親的主要胆藏物质，直链淀粉和支链淀粉的含量与比例影响着的莲藉的品质。植物淀粉合成过程受ＡＤＰ－－－葡萄糖焦磯酸化酶（ＡＤＰｇｌｕｃｏ化ｐｙ

5、ｒｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｓｅｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ，ＡＧＰａｓｅ）、颗粒结ａｎｕ－ｔ合淀粉合成酶（Ｇｒｌｅｂｏｕｎｄｓｔａｒｃｈｓｙｎｈａｓｅ，ＧＢＳＳ）、可溶性淀粉合成酶（Ｓｏｌｕｂｌｅｓｔａｒｃｈｓｙｎｔｈａｓｅ，ＳＳＳ）、淀粉分支酶（Ｓｔａｒｃｈｂｒａｎｃｈｉｎｇｅｎｚｙｍｅ，ＳＢＥ）等调控，其中ＳＳＳ在支链淀粉合成过程中起着关键作用。论文克隆得到莲親ＳＳＳ基因的全长ｃＤＮＡ序列、基因组ＤＮＡ序列，并对ＳＳＳ基因的表达特性进行了分析。－１、莲藉幼嫩叶片总ＲＮＡ为模板，采用ＲＡＣＥＰＣＲ技术

6、克隆到１个全长为４０８０ｂｐ的ＳＳＳ基因的ｃＤＮＡ序列，其中，开放阅读框为３６９６ｂｐ，编码１２３１个氨基酸。莲親品＇’＇＇＇’种鄂莲五号、美人红ＳＳＳ基因ｃＤＮＡ序列（ＫＰ２０１６％）与莲藉Ｓａｃｒｅｄｌｏｔｕｓ＇＇＇＇（迎０１０２７％７６．１）ＳＳＳ基因ｃＤＮＡ之间同源性均达９９％；美人红、鄂莲五号ＳＳＳ＿基因ｃＤＮＡ序列编码的氨基酸序列分别存在１３处差异。２、Ｗ莲親幼嫩叶片为材料，提取莲藉总ＤＮＡ，扩増得到莲親ＳＳＳ基因组ＤＮＡ序列全长为１０９２４ｂｐ，其包括１６个外显子和１５个内含子，其中第３个

7、内含子和第３个外显子最大，分别为２００６ｂｐ和１５３０ｂｐ，而第１３内含子和第２外显子最小，大小分别为９９ｂｐ和６４ｂｐ。＇Ｔ－ＰＣＲ３、采用Ｒ技术分析了莲藉ＳＳＳ基因的表达特性。发现：莲親嘆人红ＳＳＳ基因在莲親的不同组织中的表达量为：终止叶叶片＞后把叶叶片＞后把叶叶柄＞地下茎＞＇＇终止叶叶柄；鄂莲五号ＳＳＳ基因在不同组织中的表达量为：终止叶叶柄＞终止叶叶片＞地＞后把叶叶柄＇＇＇＞后把叶叶。品种间ＳＳＳ基因的表达量均片下茎，鄂莲五号髙于美’４人红。在根状茎膨大至具节段时，莲親ＳＳＳ基因在根状茎中按发

8、育的先后表达量呈逐１、２步递减的趋势，在较早发育的第节段根状茎中维持较高的表达量，且均达第３、４节＇’＇＇段根状茎表达量的２倍Ｗ上，ＳＳＳ基因的表达量均高于；品种间